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原文传递一种EMSA试剂盒及其应用

专利名称：	一种EMSA试剂盒及其应用
摘要：	本发明提供了一种EMSA试剂盒及其应用，所述试剂盒包括荧光标记探针；所述荧光标记包括Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、Alexa Fluor 488或FITC中的任意一种或至少两种的组合。本发明采用荧光基团替代放射性P32或生物素对探针进行标记，显著提高了EMSA实验的可操作性、特异性、灵敏度和结果的准确性，经过反复优化及对比，每个样品仅需10‑6～10‑7μM探针即可清晰检测到DNA特异性结合蛋白，并且在电泳后即刻得到实验结果，无需其他处理，操作简便、结果准确、检测速度快，具有广阔的应用前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	西交利物浦大学
发明人：	刘合宾;王琰
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910864845.8
公开号：	CN110487881A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N27/447(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	215123 江苏省苏州市苏州工业园区仁爱路111号
主权项：	1.一种EMSA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括荧光标记探针；所述荧光标记包括Cy2、Cy3、Cy5、Cy5.5、Cy7、Alexa Fluor 488或FITC中的任意一种或至少两种的组合。 2.根据权利要求1所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述荧光标记探针的浓度为10-6～10-7μM。 3.根据权利要求1或2所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述荧光标记探针包括靶向转录因子的探针；优选地，所述转录因子包括NF-κB、STAT3或NFAT中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述靶向NF-κB的探针包括如SEQ ID NO:1所示的核酸分子；优选地，所述靶向STAT3的探针包括如SEQ ID NO:2所示的核酸分子；优选地，所述靶向NFAT的探针包括如SEQ ID NO:3所示的核酸分子。 4.根据权利要求1-3任一项所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括EMSA结合缓冲液、竞争探针、目标蛋白特异抗体或无酶水中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述竞争探针为未标记探针。 5.根据权利要求1-4任一项所述的EMSA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括蛋白提取试剂和/或非特异性DNA结合蛋白结合试剂；优选地，所述蛋白提取试剂包括细胞裂解液、蛋白酶抑制剂或PMSF中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述非特异性DNA结合蛋白结合试剂包括poly dI-dC和/或poly dA-dT；优选地，所述非特异性DNA结合蛋白结合试剂的浓度为0.1～1μg/μL，优选为0.5～0.8μg/μL。 6.一种检测方法，其特征在于，所述方法包括采用如权利要求1-5任一项所述的EMSA试剂盒检测核酸结合蛋白的步骤。 7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)从样本中提取蛋白； (2)将提取的蛋白与非特异性DNA结合蛋白结合试剂共孵育； (3)加入荧光标记探针，孵育； (4)进行凝胶电泳，扫描读取结果。 8.根据权利要求6或7所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述样本包括细胞、组织或外周血中的任意一种或至少两种的组合；优选地，在步骤(2)之前还包括将提取的蛋白与特异性抗体室温孵育30～60min的步骤；优选地，步骤(2)所述孵育的温度为0～4℃；优选地，步骤(2)所述孵育的时间为10～60min；优选地，步骤(3)所述孵育的温度为15～30℃；优选地，步骤(3)所述孵育的时间为10～30min。 9.一种如权利要求1-5任一项所述的EMSA试剂盒和/或如权利要求6-8任一项所述的检测方法在检测核酸结合蛋白中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述核酸结合蛋白包括转录因子；优选地，所述转录因子包括NF-κB、STAT3或NFAT中的任意一种或至少两种的组合。
所属类别：	发明专利