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原文传递一种测定壳聚糖含量的方法

专利名称：	一种测定壳聚糖含量的方法
摘要：	本发明属于多糖类及其衍生物领域，涉及壳聚糖含量测定的方法，具体地说是一种高效液相色谱法测定壳聚糖含量的方法。将待测原料壳聚糖进行乙酰化处理生成甲壳素，而后对乙酰化制备的甲壳素进行酸水解得到氨基葡萄糖盐酸盐，通过对水解后得到的氨基葡萄糖盐酸盐进行高效液相色谱法测定，得其含量，进而转化计算得出原料壳聚糖的含量。本发明在于把壳聚糖衍生为甲壳素，再水解成单糖，解决了壳聚糖解离不彻底的问题。另外，该测定方法采用了蒸发光散射检测器‑‑高效液相色谱法，不仅灵敏度高、检出限低、准确性好、分离效果明显，可以排除壳聚糖分子量和脱乙酰度差异带来的干扰，是现代应用较为广泛的一种检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	中国科学院烟台海岸带研究所
发明人：	郭占勇;苗芹;秦荣基;董方;谭文强;李青
专利状态：	有效
申请日期：	2019-10-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201910977780.8
公开号：	CN110487939A
代理机构：	沈阳科苑专利商标代理有限公司
代理人：	李颖
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	264003 山东省烟台市莱山区春晖路17号
主权项：	1.一种测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：将待测原料壳聚糖进行乙酰化处理生成甲壳素，而后对乙酰化制备的甲壳素进行酸水解得到氨基葡萄糖盐酸盐，通过对水解后得到的氨基葡萄糖盐酸盐进行高效液相色谱法测定，得其含量，进而转化计算得出原料壳聚糖的含量；其中，HPLC色谱条件为：采用氨基色谱柱，检测器为蒸发光散射检测器，流动相为乙腈-水溶液（60:40，V/V），流速为0.5-1.0 mL/min，进样量为10-50 μL，柱温为25-45 ℃。 2.按权利要求1所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述通过高效液相色谱法测定数据由氨基葡萄糖盐酸盐标准曲线获得其含量；其中，标准曲线的绘制以氨基葡萄糖盐酸盐为标准品，加去离子水溶解，配制成不同浓度的一系列标准溶液，对所得不同浓度的标准溶液采用HPLC色谱条件进样检测，而后以氨基葡萄糖盐酸盐浓度为横坐标，对应的峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。 3.按权利要求2所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述配制一系列氨基葡萄糖盐酸盐标准溶液，其浓度分别为1.0 mg/mL、1.5 mg/mL、2.0 mg/mL、2.5 mg/mL、3.0 mg/mL、3.5 mg/mL；所述HPLC色谱条件为：采用氨基色谱柱，检测器为蒸发光散射检测器，流动相为乙腈-水溶液（60:40，V/V），流速为0.5-1.0 mL/min，进样量为10-50 μL，柱温为25-45℃。 4.按权利要求1或2所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于： 1）试样准备：取壳聚糖试样置于烘箱中，烘干至恒重，备用；取烘干至恒重的壳聚糖试样适量，酸碱滴定法测定壳聚糖的脱乙酰度值；以甲醇为溶剂，取烘干至恒重的壳聚糖试样适量，加入乙酸酐，进行乙酰化反应，浓缩，将所得浓缩液冷冻干燥，得壳聚糖乙酰化制备甲壳素； 2）试样溶液的制备：取干燥至恒重的壳聚糖试样适量，加入浓盐酸和去离子水，进行酸水解，得壳聚糖酸水解试样溶液；取冷冻干燥得到的壳聚糖乙酰化制备甲壳素，加入浓盐酸和去离子水进行酸水解，得壳聚糖乙酰化制备甲壳素的酸水解试样溶液； 3）试样的测定：取水解液试样溶液适量，过0.45 μm有机滤膜，HPLC进样检测，由标准曲线获得氨基葡萄糖盐酸盐的浓度，计算得到壳聚糖的含量。 5.按权利要求4所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述壳聚糖试样需用粉碎机粉碎，过10-200目筛子，四分法采样至50-300 g，置于30-150 ℃烘箱中干燥至恒重，备用。 6.按权利要求4所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述步骤1）测定壳聚糖的脱乙酰度值，是将干燥后的壳聚糖试样溶解于5-80 mL浓度为0.05-1.0 mol/L的盐酸标准滴定溶液中，加入2-10滴甲基橙-苯胺蓝指示剂，而后用浓度为0.05-1.0 mol/L的氢氧化钠标准滴定溶液滴定过量的盐酸，计算得到壳聚糖的脱乙酰度值。 7.按权利要求6所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述0.05-1.0 mol/L的氢氧化钠标准滴定溶液，是由1.0-2.0 g氢氧化钠固体溶于500 mL去离子水中，再由盐酸标准滴定溶液滴定计算而得。 8.按权利要求4所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述步骤1）对壳聚糖进行乙酰化处理得到乙酰化制备甲壳素，是以甲醇为反应溶剂，加入乙酸酐，室温搅拌反应2-48h，而后减压浓缩回收溶剂，浓缩液冷冻干燥得壳聚糖乙酰化制备甲壳素。 9.按权利要求4所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述步骤2）取干燥至恒重的壳聚糖试样10-90 mg，加入2-8 mL盐酸和1-5 mL水，梯度升温酸水解，反应结束，去除剩余盐酸，加水溶解，配制得酸水解待测溶液；取壳聚糖乙酰化制备甲壳素10-90 mg，按照上述相同方法进行水解，配制得壳聚糖乙酰化制备甲壳素的酸水解试样溶液。 10.按权利要求9所述的测定壳聚糖含量的方法，其特征在于：所述梯度升温过程为20-50 ℃反应0.5-3 h，50-80 ℃反应0.5-3 h，80-120 ℃反应2-7 h。
所属类别：	发明专利