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一种筛选降尿酸小分子化合物的方法
| 专利名称： | 一种筛选降尿酸小分子化合物的方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于膜片钳技术筛选促尿酸排泄的降尿酸小分子化合物的方法，包括以下步骤：构建表达GLUT9基因的重组质粒；将上述重组质粒瞬时转染至HEK293T细胞；18‑24h后，利用膜片钳技术记录表达GLUT9细胞转运尿酸时电流的变化；通过阳性药苯溴马隆和丙磺舒，与阴性药RDEA3170、别嘌呤醇验证模型可靠性。本发明的操作简单，简便快捷；结果稳定可靠，重现性好；相对于现有的利用爪蟾卵母细胞摄取同位素的检测方法用时更短、成本更低，可实现GLUT9抑制剂的高通量筛选。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 广东;44 |
| 申请人： | 南方医科大学 |
| 发明人： | 吴婷;陈演瑜;庞建新;周平正;赵泽安;李咏梅;李璐 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-07-11T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-11-22T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910622959.1 |
| 公开号： | CN110487877A |
| 代理机构： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 |
| 代理人： | 郑莹 |
| 分类号： | G01N27/416(2006.01);G;G01;G01N;G01N27 |
| 申请人地址： | 510515 广东省广州市白云区沙太南路1023号 |
| 主权项： | 1.一种筛选促尿酸排泄的降尿酸小分子化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)将包括编码GLUT9基因活性片段克隆到表达载体上，构建重组质粒； (2)将所述重组质粒转染至哺乳动物细胞； (3)对经转染的细胞进行膜片钳电生理实验，其中使用含尿酸的电极外液； (4)将待检测的小分子化合物加到含尿酸的含尿酸的电极外液中，当与未加所述待检测的小分子化合物相比，电流明显降低时，则判断所述待检测的小分子化合物为对GLUT9有抑制作用的降尿酸小分子化合物。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述重组质粒的构建方法是将克隆有所述GLUT9基因活性片段的表达载体转化进入大肠杆菌菌株，将菌液均匀涂布到混有抗生素的固体培养基上，挑取单克隆筛选出含目的质粒的菌株进行培养。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)待哺乳动物细胞融合至80％时，将重组质粒和EGFP共转染到哺乳动物细胞。 4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物细胞为HEK293T细胞、仓鼠卵巢细胞CHO、非洲绿猴肾成纤维细胞Cos7。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述膜片钳电生理实验是将玻片放在连有金属电极的细胞外液中，将玻璃微电极移到带荧光的细胞的上方，给予负压，待电极与细胞之间形成大于1GΩ的高阻封接，电容补偿后，将细胞钳制在-30mV，记录电流变化。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)转染细胞18～24小时后，将细胞传代进行膜片钳电生理实验。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以2-3ml/min的速度灌流含有所述待检测的小分子化合物的电极尿酸外液。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用膜片钳技术，记录瞬转所述重组质粒的HEK293T细胞转运尿酸时细胞电流大小的变化。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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