详情

原文传递一种高效液相色谱法测定虫草中虫草素含量的方法

专利名称：	一种高效液相色谱法测定虫草中虫草素含量的方法
摘要：	本发明具体涉及虫草中虫草素含量的检测方法，本检测方法首次应用氯乙醛与虫草样品提取液进行衍生化反应，操作简便，采用高灵敏度及选择性高效液相色谱条件，可将虫草中2’‑脱氧腺苷与虫草素的色谱峰分离开来，准确定量，同时还能够测定其他主要成分的含量，准确度高，检验方法符合含量测定方法学要求，为准确评价虫草质量提供了先进的检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉大学
发明人：	胡汉昆;苏亚霞;张莹雯;高卫;杨雨飞;叶旭军;林嫚婷
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910699621.6
公开号：	CN110470754A
代理机构：	武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	吴楚
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山武汉大学
主权项：	1.一种高效液相色谱法测定虫草中虫草素的方法，包括制备虫草液相检测样品溶液、制备对照品溶液及高效液相色谱法分析步骤，其特征在于，制备虫草液相检测样品包括以下步骤：先制备虫草样品提取液，再向所得提取液加入氯乙醛进行衍生。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，虫草样品提取液的制备方法为：将虫草干燥、研磨过三号筛得粉末，将粉末溶于体积比为1:1的甲醇和水混合溶液中振荡提取，其中虫草粉与甲醇和水混合溶液的比例为0.5g：20ml，然后离心取上清液，用0.22μm微孔滤膜过滤，即得提取液。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取液与氯乙醛的比例为：10：1。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备对照品溶液包括以下步骤：配制梯度浓度的对照品溶液，将所得对照品溶液采用PBS缓冲液稀释，再加入氯乙醛进行衍生。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：稀释后的对照品溶液与氯乙醛的体积比为10：1。 6.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，加入氯乙醛衍生的方法为：加入氯乙醛后，将所得溶液放入37℃水浴锅衍生化16h-20h。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，37℃水浴锅衍生化时间为16h。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，高效液相色谱法分析的步骤为：分别吸取对照品溶液与虫草液相检测样品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定，计算，即可得到成分含量，其中实验参数设置如下：流动相流速：1.0mL/min；检测器波长：荧光检测的激发和发射波长分别为275nm和411nm；色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述流动相由体积比为5:95的乙腈和水的混合溶液中加入三乙胺-醋酸缓冲液混合而得，其中，三乙胺-醋酸缓冲液的浓度为0.1mol/L，乙腈和水的混合溶液：三乙胺-醋酸缓冲液的质量比为95:5。 10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液包括虫草素、腺苷、2’-脱氧腺苷、腺嘌呤溶液。
所属类别：	发明专利