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原文传递一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法

专利名称：	一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法
摘要：	本发明公开了一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法。具体包括(1)样品制备过程；(2)进行顶空气相色谱检测；(3)结果计算。本发明所述方法是基于测量CMCS的氨基和羧基基团的含量来实现的，具有良好的测量精度(RSD<2.55％)和准确度(相对差异<5.90％)。与目前基于滴定的方法相比，本发明的HS‑GC技术在CMCS中氨基和羧基含量的定量检测方面提供了更可靠的方法。此外，由于HS‑GC可以进行自动化的样品反应和测试，因此在批量样品的测试分析中更为有效。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	华南理工大学
发明人：	闫宁;柴欣生
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910643903.4
公开号：	CN110455940A
代理机构：	广州市华学知识产权代理有限公司
代理人：	雷月华
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	510640广东省广州市天河区五山路381号
主权项：	1.一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)将CMCS和碳酸氢盐溶液加入顶空瓶中，密封好，混合均匀，得到样品a，其中CMCS和碳酸氢盐溶液中的溶质质量比为(1～5):1；将CMCS加入强酸溶液中，搅拌溶解，得到酸化后的CMCS，加水稀释，将稀释后的混合液移入透析袋中，在水中进行透析，达到透析平衡后，取透析袋外的水混合液加入顶空瓶中，同时加入碳酸氢盐溶液，密封好，混合均匀，得到样品b；其中CMCS与强酸溶液中的溶质质量比为(1～3)：0.75；将水加入顶空瓶中，密封好，得到空白样品； (2)将样品a、样品b和空白样品分别置于顶空进样器中，设置顶空进样器及气相色谱仪操作条件，进行顶空气相色谱检测，分别记录样品a、样品b和空白样品对应二氧化碳的气相色谱信号值； (3)根据测得的二氧化碳气相色谱信号值，计算得到羧甲基壳聚糖的脱乙酰度和取代度。 2.根据权利要求1所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(1)所述强酸溶液的浓度为0.1023mol/L；所述CMCS在强酸溶液中的初始浓度为10g/L，加水稀释后其浓度不高于2.7g/L。 3.根据权利要求1或2所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(1)所述搅拌溶解的时间不少于30min；所述透析袋的截留分子量为3500Da，压平宽度为34mm；透析时间不少于1h；所述稀释后的混合液与透析所用水的体积比为1：10。 4.根据权利要求3所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(1)制备样品a所用碳酸氢盐溶液的浓度为0.025mol/L；制备样品b所用碳酸氢盐溶液的浓度0.05mol/L，所述加入顶空瓶中的水混合液与碳酸氢盐溶液的体积比为4：1。 5.根据权利要求1所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(3)所述羧甲基壳聚糖的脱乙酰度和取代度计算方法如下： ①按照公式(1)计算羧甲基壳聚糖中的氨基含量：其中A为样品a的CO2气相色谱信号值扣除空白样品的CO2气相色谱信号值得到的CO2净信号值，m为样品a的重量(g)，w为样品a中的水含量(％)； ②按照公式(2)计算酸化后羧甲基壳聚糖中羧基和氨基的总含量： Ctotal(mmol/g)＝12.0-0.37(A-0.09) (2) 其中，A为样品b的CO2气相色谱信号值扣除空白样品的CO2气相色谱信号值得到的CO2净信号值； ③按照公式(3)计算酸化后羧甲基壳聚糖中羧基的含量： ④按照公式(4)和(5)计算羧甲基壳聚糖的脱乙酰度DD和取代度DS：其中203、42和80分别代表甲壳质残基、乙酰基和-CH2COONa基团的摩尔质量g/mol。 6.根据权利要求3所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(1)所述碳酸氢盐溶液均为碳酸氢钠溶液；所述强酸溶液为HCl溶液。 7.根据权利要求3所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(1)所述混合均匀的混合方式均为磁力搅拌，搅拌的时间均为5min。 8.根据权利要求3所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(1)所述顶空瓶的体积均为21.6mL，其中样品a、样品b或空白样品在顶空瓶中的体积均为5ml。 9.根据权利要求3所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(2)所述顶空进样器的操作条件为：平衡温度60℃，平衡时间为10min，辅助气压力为80KPa，顶空瓶中载气平衡时间为12s，管路充气时间为12s，管路平衡时间为3s，环路平衡时间为12s。 10.根据权利要求1所述一种同时测定羧甲基壳聚糖脱乙酰度和取代度的顶空气相色谱方法，其特征在于，步骤(2)所述气相色谱仪的操作条件：色谱柱温为105℃，保留时间为2min；氮气作为载气，TCD作为检测器；所述氮气流量为2.7mL/min，TCD检测器温度为220℃。
所属类别：	发明专利