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原文传递基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法

专利名称：	基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法
摘要：	本发明特别涉及一种基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法,包括如下步骤：(A)取正常尿液和待检测尿液，去除尿液中的尿素；(B)向去除尿素后的正常尿液中加入肌酐粉末，制作标准浓度肌酐样本；(C)SERS基底合成；(D)采集肌酐样本和去除尿液的待检测尿液在SERS基底上反应后的SERS光谱，对光谱数据进行处理得到待检测尿液中的肌酐浓度。通过去除尿液中尿素，可避免尿素的‑NH2基团对SERS的增强基底金/银颗粒的强吸附而阻碍尿液中肌酐分子的吸附，进而消除了尿液的SERS检测中存在大量尿素造成的竞争效应，提高了尿液中肌酐的拉曼响应，检测灵敏度高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	中科院合肥技术创新工程院
发明人：	徐青山;郑守国;邱梦情;翁士状;刘瑜凡;王海燕;朱恭钦;孙熊伟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-15T00:00:00+0800
申请号：	CN201910864591.X
公开号：	CN110455777A
代理机构：	北京中济纬天专利代理有限公司
代理人：	秦超
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	230088安徽省合肥市习友路2666号
主权项：	1.一种基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：包括如下步骤： (A)取正常尿液和待检测尿液，去除尿液中的尿素； (B)向去除尿素后的正常尿液中加入肌酐粉末，制作标准浓度肌酐样本； (C)SERS基底合成； (D)采集肌酐样本和去除尿液的待检测尿液在SERS基底上反应后的SERS光谱，对光谱数据进行处理得到待检测尿液中的肌酐浓度。 2.如权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤A中，按如下步骤去除尿液中的尿素： (A1)收集人的24小时尿液； (A2)制备浓度均为0.6M的盐酸溶液和亚硝酸钠溶液； (A3)将步骤A1中的尿液和步骤A2中的盐酸溶液、亚硝酸钠溶液按照1:1:1的体积比于离心管中混合，并放在超声波清洗机中超声5～10分钟进行充分混合； (A4)充分混合后将溶液放在冰水中于0～4℃条件下反应2小时以上。 3.如权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤B中，按如下步骤制作肌酐样本： (B1)分别取一定量去除尿素后的正常尿液于离心管中； (B2)再称取不同重量的肌酐粉末分别加入离心管中，获得不同浓度的去除尿素后的正常尿液中肌酐样本； (B3)将离心管放在超声清洗机中超声20～40min，使肌酐粉末在去除尿素后的正常尿液中充分溶解混匀后放在冰箱中储存备用，冰箱内的温度为0～4℃。 4.如权利要求3所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤B1中，分别于7个5mL的离心管中加入2mL去除尿素后的正常尿液；所述的步骤B2中，分别称取0.0004g、0.0008g、0.0012g、0.0016g、0.0020g、0.0024g、0.0028g的肌酐粉末加入步骤B1中的7个离心管中，获得浓度为200、400、600、800、1000、1200、1400mg/L去尿素尿液的肌酐样本。 5.如权利要求1所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤C中，按如下步骤进行SERS基底合成： (C1)配置所需试剂； (C2)制备晶种溶液； (C3)合成母液并加入晶种溶液； (C4)放在水浴锅中静置24h生长成金纳米棒； (C5)取金纳米棒溶液进行清洗后，滴在硅片上成膜制得SERS基底。 6.如权利要求5所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤C1中，按如下步骤制备所需试剂： (C11)将1g四水氯金酸粉末加入100mL棕色定量瓶中，加超纯水至刻度100mL，充分混匀溶解12h以上，获得浓度为1％的HAuCl4溶液； (C12)用量筒量取100mL超纯水于带有磁子的250mL锥形瓶中，称取7.65345g十六烷基三甲基溴化铵粉末加入锥形瓶中，再量取110mL超纯水缓慢加入锥形瓶中，中间不要产生泡沫，将该锥形瓶放入温度为40～45℃的烘箱中使得十六烷基三甲基溴化铵粉末溶解，直至锥形瓶底部没有块状晶体，获得CTAB溶液； (C13)称取0.135896g硝酸银粉末于100mL棕色定量瓶中，加入超纯水至刻度100mL进行溶解，获得浓度为0.008M的AgNO3溶液； (C14)称取0.8806g的L-抗坏血酸粉末于50mL棕色定量瓶中，加入超纯水至刻度50mL进行溶解，获得浓度为0.1M的AA溶液； (C15)称取0.0189g硼氢化钠粉末于50mL棕色定量瓶中，加入冰水至刻度50mL进行溶解，获得浓度为0.01M的NaBH4溶液，用封口胶封住瓶口； (C16)在100mL棕色定量瓶中加入13.234mL质量分数为68％的硝酸，加入超纯水至刻度100mL稀释，获得浓度为2M的硝酸溶液；以上所有溶液，除CTAB溶液外均放在冰箱中储存备用，冰箱内的温度为0～4℃；所述的NaBH4溶液有效时间为1小时。 7.如权利要求6所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤C2中，按如下步骤制备晶种溶液： (C21)从溶解完全的210mL的CTAB溶液中吸取10mL放入带有磁子的50mL锥形瓶中，锥形瓶放在恒温磁力搅拌器上的水浴锅中搅拌，水浴锅中水的高度高于锥形瓶中CTAB溶液的高度，水浴温度为27～30℃，搅拌转速为400～500rpm/min； (C22)向锥形瓶中逐滴加入103uL浓度为1％的HAuCl4溶液； (C23)快速加入0.6mL浓度为0.01M的NaBH4溶液，搅拌均匀； (C24)10min后停止搅拌，等待反应30min生成晶种溶液。 8.如权利要求7所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤C3中，按如下步骤合成母液并加入晶种溶液： (C31)将剩余200mL的CTAB溶液的锥形瓶放在恒温磁力搅拌器上的水浴锅中，水浴锅中水的高度高于锥形瓶中CTAB溶液的高度，水浴温度为28～32℃，搅拌转速为600rpm/min； (C32)逐滴加入4.12mL浓度为1％的HAuCl4溶液，搅拌混匀； (C33)逐滴加入1.2mL浓度为0.008M的AgNO3溶液，搅拌混匀； (C34)加入2mL浓度为2M的硝酸溶液用于调节溶液PH； (C35)逐滴加入1.2mL浓度为0.1M的AA溶液到锥形瓶中，搅拌混匀； (C36)逐滴加入240uL的晶种溶液到锥形瓶中，搅拌混匀； (C37)10min后停止搅拌并执行步骤C4。 9.如权利要求8所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤C5中，按如下步骤进行清洗并制得SERS基底： (C51)用移液枪吸取1mL金纳米棒溶胶溶液于1.5mL离心管中； (C52)将1.5mL离心管放入离心机中离心10min，转速为8200～8500rpm/min； (C53)离心结束后，取出1.5ml离心管，用移液枪移除上清液，再向1.5ml离心管中加入超纯水，于超声波清洗机中超声3min左右； (C54)重复步骤C52，同时将转速降至7600～8000rpm/min； (C55)重复步骤C53和C52，执行步骤C52时将转速降至7000～7600rpm/min； (C56)离心结束后，取出1.5ml离心管，用移液枪移除上清液，取10uL底部物质滴在3-4个硅片上，等待自然风干成膜，制得SERS基底。 10.如权利要求9所述的基于表面增强拉曼光谱的新型尿液中肌酐检测方法，其特征在于：所述的步骤D中，包括如下步骤： (D1)分别取2uL步骤B3得到的不同浓度的去尿素尿液中肌酐样本滴在步骤C56制得的SERS基底上进行反应，等待自然风干； (D2)将反应后的硅片放在便携式拉曼光谱仪的物镜下，打开激光，采集得到标准SERS光谱； (D3)对步骤D2采集到的标准SERS光谱进行数据处理得到肌酐的拉曼特征峰位置； (D4)按照步骤D1和D2，采集去除尿素的待检测尿液在SERS基底上反应后的SERS光谱，并将该SERS光谱在肌酐的拉曼特征峰位置光强与标准SERS光谱在肌酐的拉曼特征峰位置光强进行线性运算得到待检测尿液中肌酐浓度。
所属类别：	发明专利