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原文传递一种检测副溶血性弧菌的方法

专利名称：	一种检测副溶血性弧菌的方法
摘要：	本发明涉及一种检测副溶血性弧菌的方法，包括以下步骤：（1）制备检测线包被副溶血性弧菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条；（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；（3）检测副溶血性弧菌含量。基于包被铂的金磁纳米颗粒（Fe3O4@Au@Pt）具有的内在的过氧化酶模拟酶特性，该试纸条可采用颜色法测定样品中的副溶血性弧菌含量。本发明的试纸条具有检测限低（10cfu/mL）、特异性好、成本低廉、检测时间短等优势，能够满足现场快速检测的需求，适用于液体样品中致病菌及各种有毒有害物质的检测，极具实用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	齐鲁工业大学
发明人：	吴正宗;刘鹏飞;崔波;袁超;于滨;郭丽;赵海波;陶海腾
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-19T00:00:00+0800
申请号：	CN201910841691.0
公开号：	CN110470840A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	王翠翠
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250399 山东省济南市长清区大学路3501号
主权项：	1.一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）制备磁性金属模拟酶Fe3O4@AuNPs，制备检测线包被副溶血性弧菌抗体、质控线包被羊抗鼠IgG抗体的试纸条；（2）在试纸条检测区域下方放置磁铁；（3）磁性金属模拟酶的制备：Fe3O4@Au@Pt纳米颗粒表面修饰副溶血性弧菌抗体；（4）检测预处理的样品中副溶血性弧菌含量。 2.根据权利要求1所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，所述的磁铁的磁场强度在20mT-200mT。 3.根据权利要求1所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、磁性纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被副溶血性弧菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体。 4.根据权利要求3所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：（1）磁性金属模拟酶的制备：合成磁性纳米颗粒Fe3O4，在其表面包被一层金壳，得到Fe3O4@Au纳米颗粒，接着在Fe3O4@Au纳米颗粒表面包被一层铂，得到Fe3O4@Au@Pt纳米颗粒；在Fe3O4@Au@Pt纳米颗粒表面修饰副溶血性弧菌抗体；（2）样品富集预处理：将修饰副溶血性弧菌抗体的Fe3O4@Au@Pt纳米颗粒溶液加入到样品溶液中充分反应，富集样品中存在的副溶血性弧菌，然后在外加磁场条件下，分离出结合副溶血性弧菌的免疫磁性纳米颗粒，重新溶解在PBS溶液中；（3）硝基纤维膜的处理：将副溶血性弧菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；（4）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸，组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到所述定量检测副溶血性弧菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。 5.根据权利要求1所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，试纸条还包括模纳米颗粒标记物结合垫有修饰副溶血性弧菌抗体的包被铂的金磁纳米颗粒Fe3O4@Au@Pt。 6.根据权利要求1所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，金磁纳米颗粒Fe3O4@UCNPs直径为50-200nm。 7.根据权利要求6所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，所述的试纸条包括包括衬板、样品垫、纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述样品垫、磁性纳米颗粒标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸由后到前依次粘贴吸附在所述衬板上，所述硝酸纤维素膜上划有一根检测线和一根质控线；所述检测线包被副溶血性弧菌抗体；所述质控线包被羊抗鼠IgG抗体；所述模纳米颗粒标记物结合垫有修饰副溶血性弧菌抗体的包被铂的金磁纳米颗粒Fe3O4@Au@Pt。 8.根据权利要求6或7所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，试纸条的制备方法包括以下步骤：（1）磁性金属模拟酶的制备：合成磁性纳米颗粒（Fe3O4），在其表面包被一层金壳，得到Fe3O4@Au纳米颗粒，接着在Fe3O4@Au纳米颗粒表面包被一层铂，得到Fe3O4@Au@Pt纳米颗粒；在Fe3O4@Au@Pt纳米颗粒表面修饰副溶血性弧菌抗体；（2）结合垫的处理：将合成的修饰副溶血性弧菌抗体的Fe3O4@Au@Pt纳米颗粒溶液喷于结合垫上，37℃烘干，得到处理后的标记物结合垫；（3）硝基纤维膜的处理：将副溶血性弧菌抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测线，将羊抗鼠IgG抗体溶液喷涂在硝基纤维膜上形成检测质控线，烘干，即得到处理后的硝基纤维膜；（4）试纸条的组装：在衬板上依次搭接并粘贴处理后的样品垫、结合垫和硝酸纤维素膜，再在酸纤维素膜的一侧搭接吸水纸，组装后裁剪为60mm长，3.8mm宽的试纸条，即得到所述定量检测副溶血性弧菌的免疫层析试纸条，将制得的试纸条与干燥剂一起装入避光袋密封保存待用。 9.根据权利要求1-8之一所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，副溶血性弧菌为单克隆抗体或多克隆抗体。 10.根据权利要求1-8之一所述的一种检测副溶血性弧菌的方法，其特征在于，样品溶液在试纸条上层析结束后，在检测区域加入一定量的3,3',5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢溶液，反应5分钟后，拍下检测区域的图像，基于图像定量测定样品中的副溶血性弧菌含量。
所属类别：	发明专利