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原文传递作为肾脏疾病的生物标志物的尿液流式细胞术

专利名称：	作为肾脏疾病的生物标志物的尿液流式细胞术
摘要：	本发明提供一种确认患者患有肾病或发生肾移植排斥反应的可能性的方法，所述方法包括以下步骤：提供来自所述患者的尿样，并确定T细胞、足细胞和近端肾小管上皮细胞的浓度。这些细胞类型的比例用于确定肾病或移植排斥的风险。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	德国;DE
申请人：	柏林夏瑞蒂医科大学
发明人：	菲利普·英格;尼娜·格里克;汉娜·安东尼娅·布兰德;瓦莱丽·朗汉斯;佩特拉·雷因克
专利状态：	有效
申请日期：	2018-03-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201880020575.6
公开号：	CN110506206A
代理机构：	广州市华学知识产权代理有限公司
代理人：	陈燕娴
分类号：	G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	德国柏林
主权项：	1.一种确认患者患有肾病或发生肾移植排斥反应的可能性的方法，所述肾病特别地选自肾移植排斥、急性肾功能衰竭、自身免疫性疾病引起的急性肾功能衰竭、狼疮性肾炎、ANCA相关性肾小球肾炎和糖尿病肾病，其特征在于，所述方法包括以下步骤： a.提供从所述患者获得的尿样； b.确定所述尿样中的T细胞浓度、足细胞浓度和近端肾小管上皮细胞浓度，并可选地确定所述尿样中远端肾小管上皮细胞浓度。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于， -所述T细胞的特征在于表达CD3、CD4和CD8中的至少一个， -所述足细胞的特征在于表达足糖萼蛋白、足蛋白、去氧肾上腺素和WT1中的至少一个， -所述近端小管上皮细胞的特征在于表达CD10， -所述远端小管上皮细胞的特征在于表达EPCAM，并且，通过使所述细胞与配体组接触来实现步骤b，其中所述配体组包括能够结合CD4、CD8和CD10中的每种的配体、能够结合足糖萼蛋白、足蛋白、去氧肾上腺素和WT1中的一种的配体，并可选地能够结合细胞角蛋白、CD3和/或EPCAM的配体，其中所述配体中的每个能够特异性地结合CD3、CD4、CD8、足糖萼蛋白、足蛋白、去氧肾上腺素、WT1、CD10、细胞角蛋白和EPCAM中的一种。 3.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，通过流式细胞术来确定所述T细胞浓度、所述足细胞浓度、所述近端肾小管上皮细胞的浓度和可选的所述远端肾小管上皮细胞浓度中的每个。 4.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤： c.根据步骤b中确定的所述T细胞浓度、所述足细胞浓度、所述近端和远端肾小管上皮细胞浓度来确定足细胞/T细胞比例、足细胞/近端小管上皮细胞比例、足细胞/远端小管上皮细胞比例、T细胞/近端小管上皮细胞比例和/或T细胞/远端小管上皮细胞比例； d.将步骤c中确定的所述足细胞/T细胞比例、所述足细胞/近端小管上皮细胞比例、所述T细胞/近端小管上皮细胞比例和/或所述T细胞/远端小管上皮细胞比例与阈值进行比较； e.确认所述患者具有患有肾病或发生肾移植排斥反应的高可能性： i.如果所述足细胞/T细胞比例低于足细胞/T细胞阈值和/或 ii.如果所述足细胞/近端小管上皮细胞比例高于足细胞/近端小管上皮细胞阈值和/或 iii.如果所述足细胞/远端小管上皮细胞比例高于足细胞/近端小管上皮细胞阈值和/或 iv.如果所述T细胞/近端小管上皮细胞比例高于T细胞/近端小管上皮细胞阈值和/或 v.如果所述T细胞/远端小管上皮细胞比例高于T细胞/远端小管上皮细胞阈值。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，进一步在所述T细胞浓度高于T细胞阈值的情况下，确认所述患者具有发生肾移植排斥反应的高可能性，特别地，其中 -所述T细胞阈值为2000-500个T细胞/100ml尿液，特别地1500-550个T细胞/100ml尿液，更特别地1000-600个T细胞/100ml尿液，甚至更特别地约600个T细胞/100ml尿液； -所述足细胞/T细胞阈值为0.01-0.3，特别地0.02-0.2，更特别地0.1-0.2，甚至更特别地约0.2； -所述足细胞/近端小管上皮细胞阈值为1-13，特别地1.5至10，更特别地2-5，甚至更特别地约3； -所述T细胞/近端小管上皮细胞阈值为0.2；和/或 -所述T细胞/远端小管上皮细胞阈值为0.02。 6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，进一步在所述T细胞浓度高于T细胞阈值的情况下，确认所述患者具有患有肾病的高可能性，特别地，其中 -所述T细胞阈值为1500-200个T细胞/100ml尿液，特别地1000-250个T细胞/100ml尿液，更特别地800-300个T细胞/100ml尿液，甚至更特别地约400个T细胞/100ml尿液； -所述足细胞/T细胞阈值为10-2，特别地8-3，更特别地6-4，甚至更特别地约5； -所述足细胞/近端小管上皮细胞阈值为0.5-5，特别地0.8-4，更特别地1-3，甚至更特别地约1.5； -所述足细胞/远端小管上皮细胞阈值为0.5-5，特别地0.8-4，更特别地1-3，甚至更特别地约1.5； -所述T细胞/近端小管上皮细胞阈值为0.05-1.0，特别地0.1-0.8，更特别地0.15-0.5，甚至更特别地约0.2；和/或 -所述T细胞/远端小管上皮细胞阈值为0.05-1.0，特别地0.1-0.8，更特别地0.15-0.5，甚至更特别地约0.2。 7.根据权利要求4或6所述的方法，其特征在于，T细胞/远端小管上皮细胞比例高于0.02，特别地高于0.03，则指示患者患有狼疮性肾炎。 8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，如果所述T细胞浓度高于所述T细胞阈值，且所述足细胞/T细胞比例低于所述足细胞/T细胞阈值，则确认所述患者具有急性细胞移植排斥反应的高可能性。 9.根据权利要求5至8所述的方法，其特征在于，如果所述T细胞浓度高于所述T细胞阈值，且所述足细胞/近端小管上皮细胞比例高于所述足细胞/近端小管上皮细胞阈值，则确认所述患者具有急性体液移植排斥反应的高可能性。 10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，将步骤b中确定的所述T细胞浓度、所述足细胞浓度、所述近端肾小管上皮细胞浓度和/或所述远端肾小管上皮细胞浓度中的每个与相应的预定细胞类型阈值进行比较，如果所述浓度中的至少两个、特别地至少三个、更特别地至少四个、甚至更特别地所有所述浓度高于所述相应的预定阈值，则确认所述患者患有肾病或发生肾移植排斥反应的高可能性。 11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其特征在于，确定CD8+T细胞、CD4+细胞、足细胞、近端小管上皮细胞和远端肾小管上皮细胞的总浓度，如果所述总浓度高于整体细胞浓度阈值，则确认所述患者具有患有肾病或发生肾移植排斥反应的高可能性。 12.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其特征在于，在肾移植后的第4天或之后提供所述样品，特别地在肾移植后或之后的第5天。 13.一种确认肾移植患者是否需要实施增强免疫抑制疗法的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： -根据上述权利要求中任一项的方法确定所述患者具有移植排斥反应的可能性； -如果确定具有移植排斥反应的高可能性，则确认所述患者需要实施增强免疫抑制疗法；特别地，其中 a.如果确定具有急性细胞移植排斥反应的高可能性，则确认所述患者需要进行适于急性细胞移植排斥反应的疗法，特别地选自：用高剂量可的松的疗法、用增加剂量的免疫抑制药物的免疫抑制疗法、用抗T细胞的治疗性抗体的疗法、用抗胸腺细胞球蛋白的疗法和用其他包括抗TNF的治疗性抗体的疗法； b.如果确定具有急性体液移植排斥反应的高可能性，则确认所述患者需要进行适于急性体液移植排斥的疗法，特别地选自：用高剂量可的松的疗法、血浆交换和用包括利妥昔单抗的抗B细胞的治疗性抗体的疗法。 14.一种确认肾移植患者是否需要进行肾脏活组织检查的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： -根据上述权利要求中任一项的方法确定所述患者具有移植排斥反应的可能性； -如果确定具有移植排斥反应的高可能性，则确认所述患者需要进行肾脏活组织检查。 15.一种用于确定患者患有肾病或发生肾移植排斥反应的可能性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括抗CD8和/或抗CD4抗体、抗CD10抗体、选自抗足糖萼蛋白抗体、抗足蛋白抗体、抗去氧肾上腺素抗体和抗WT1抗体中的一种抗体，以及可选地抗EPCAM抗体和/或抗细胞角蛋白抗体，其中所述抗体适于基于荧光的流式细胞术。 16.一种抗体组合在确定患者患有肾病或发生肾移植排斥反应的可能性中的应用，其特征在于，所述抗体组合包括抗CD8和/或抗CD4抗体、抗CD10抗体、选自抗足糖萼蛋白抗体、抗足蛋白抗体、抗去氧肾上腺素抗体和抗WT1抗体中的一种抗体，以及可选地抗EPCAM抗体和/或抗细胞角蛋白抗体。 17.一种用于确定患者患有肾病或发生肾移植排斥反应的可能性的系统，其特征在于，所述系统包括： a.用于确定从受试者获得的样品中的细胞频数的装置，以及 b.编程微处理器，其中所述编程微处理器用于运行根据上述权利要求中任一项所述的方法。
所属类别：	发明专利