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原文传递一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法

专利名称：	一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法
摘要：	本发明的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，属于医药实验技术领域。本发明的方法通过将昆明小鼠进行分组实验，控制区别变量为尼古丁和枸杞多糖，实验培养后对不同组别的昆明小鼠的精子活性进行分析计算，便于发现枸杞多糖与缓解尼古丁诱发的精子活力下降关系以及catsper基因、SOD1和SOD2基因在这一过程中发挥的重要的作用。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	长治医学院
发明人：	宋少娟;彭超;张海娇;田晓旭;林恩琴;谢翼;马红莲;刘明社
专利状态：	有效
申请日期：	2018-05-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201810471264.3
公开号：	CN110501482A
分类号：	G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	046000 山西省长治市解放东街161号
主权项：	1.一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于：通过将昆明小鼠进行分组实验，控制区别变量为尼古丁和枸杞多糖，实验培养后对不同组别的昆明小鼠的精子活性进行分析计算。 2.根据权利要求1所述的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于，该方法具体步骤为： S100、实验分组，将成年雄性昆明小鼠，随机分为四组，每组十只昆明小鼠，四组分别为A、B、C、D； S200、实验培养，分别用生理盐水，尼古丁，枸杞多糖，尼古丁+枸杞多糖对四组实验昆明小鼠进行喂养； S300、实验样本制备，分别将各组昆明小鼠进行解剖，取其双侧睾丸和附睾，制备为A1、B1、C1、D1四组； S400、精子活性分析，对步骤S300所得的四组精子悬液进行取样，通过显微镜观察精子活性，进行分析； S500、基因分析，分别取得A、B、C、D四组昆明小鼠的睾丸中的基因，记录基因的表达量； S600、得到结果，通过对步骤S400和S500得到的结果进行分析，得到最终结果。 3.根据权利要求2所述的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于，所述步骤S200中实验培养具体为：在早上7:00和晚上7:00分别对四组昆明小鼠进行灌胃，其中A组为生理盐水，B组为尼古丁，C组为枸杞多糖，D组为尼古丁+枸杞多糖，持续八周。 4.根据权利要求2所述的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于，所述步骤S300中实验样本制备具体为：解剖昆明小鼠取其双侧睾丸和附睾，将每组昆明小鼠附睾剪碎后放入等量37摄氏度的生理盐水中，进行搅拌，得到a、b、c、d四组实验样本。 5.根据权利要求2所述的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于，所述步骤S400中精子活性分析具体为：从步骤S300所得的a、b、c、d四组实验样本中各取1ml精子悬液，并将精子悬液稀释十倍后用细胞记数板在显微镜下观察昆明小鼠精子活力。 6.根据权利要求2所述的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于，所述步骤S500中基因分析具体为：分别从各组昆明小鼠睾丸中提取RNA，将RNA并反转录得到cDNA，通过qPCR得到其基因的表达量。 7.根据权利要求5所述的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于：所述步骤S400中显微镜观察精子活性的方法具体为，分别记录a组样本中的自由活动的精子数量为a1、缓慢活动的精子数量为a2、原地抖动的精子数量为a3、不能运动的精子数量为a4；分别记录b组样本中的自由活动的精子数量为b1、缓慢活动的精子数量为b2、原地抖动的精子数量为b3、不能运动的精子数量为b4；分别记录c组样本中的自由活动的精子数量为c1、缓慢活动的精子数量为c2、原地抖动的精子数量为c3、不能运动的精子数量为c4；分别记录d组样本中的自由活动的精子数量为d1、缓慢活动的精子数量为d2、原地抖动的精子数量为d3、不能运动的精子数量为d4；分别计算其精子存活率为A1、B1、C1、D1。 8.根据权利要求6所述的一种缓解尼古丁致小鼠精子数量和活力下降的分析方法，其特征在于：所述步骤S500中基因分析具体为对其中的catsper基因、SOD1和SOD2基因进行分析，得到三种基因表达量相对倍数的差异。
所属类别：	发明专利