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原文传递一种p16免疫细胞化学标记显色试剂盒

专利名称：	一种p16免疫细胞化学标记显色试剂盒
摘要：	本发明涉及生物科技技术领域，具体为一种p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，检测试剂盒中包括以下试剂：0.5－1.0ml的p16免疫细胞标准品浓度为81pg/mL；1.5－2.0ml的标准品稀释液；2－4ml辣根过氧化物酶；2－4ml样品稀释液；2－4ml显色剂A液；2－4ml显色剂B液；2－4ml终止液；20ml×20倍的浓缩洗涤液。本发明用纯化的人p16抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入pl6，再与辣根过氧化物酶标记的p16抗体结合，形成抗体－抗原－酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加显色剂A底物显色。显色剂A和B在辣根过氧化物酶酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色，定位效果和显色效果好，标记更加明显，颜色的深浅和样品中的p16呈正相关，用酶标仪在450nm波长下测定吸光度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳市森盈生物科技有限公司
发明人：	黄子权
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910804572.8
公开号：	CN110501497A
代理机构：	广州德伟专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	黄浩威;何文颖
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	518000 广东省深圳市南山区桃源街道龙珠三路南山睿园9栋4楼401
主权项：	1.一种p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括以下试剂： 0.5－1.0ml的p16免疫细胞标准品浓度为81pg/mL； 1.5－2.0ml的标准品稀释液； 2－4ml辣根过氧化物酶； 2－4ml样品稀释液； 2－4ml显色剂A液； 2－4ml显色剂B液； 2－4ml终止液； 20ml×20倍的浓缩洗涤液。 2.根据权利要求1所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：p16免疫细胞标准品、标准品稀释液、辣根过氧化物酶、样品稀释液、显色剂A液、显色剂B液、终止液和浓缩洗涤液均在2－8℃的环境中进行保存。 3.根据权利要求1所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：试剂盒从冷藏环境中取出后，在室温放置15－30min后再进行使用。 4.根据权利要求1所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：检测试剂盒的实验使用步骤具体如下： S1样本处理：将样本进行离心处理后，获取上清液； S2标准品稀释：酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μL，在第一、第二孔中加标准品稀释液50μL，混匀，从第一孔、第二孔中各取100μL分别加至第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μL混匀，在第三孔和第四孔中先各取50μL弃掉，再各取50μL分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μL分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μL，混匀后从第七、第八孔中分别取50uL加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μL，混匀后从第九第十孔中各取50μL弃掉，稀释后十个孔中的容量均为50μL，浓度分别为54pg/mL、54pg/mL、36pg/mL、36pg/mL、18pg/mL、18pg/mL、9pg/mL、9pg/mL、4.5pg/mL、4.5pg/mL； S3加样：每组设置一个空白对照组，不加样品及辣根过氧化物酶，其余各步操作相同，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μL，再加待测样品10μL，样品最终稀释度为5倍，加样将样品加于酶标板孔底部，不触及孔壁，摇晃混匀； S4温育：用封板膜封板后置35－37℃温育30－40分钟； S5配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用； S6洗涤：打开封板膜，弃去液体，每孔加满稀释后的洗涤液，静置30s后弃去，重复5次； S7加酶：在处空白孔除外的每孔加入辣根过氧化物酶50μL； S8温育洗涤：用封板膜封板后置35－37℃温育30－40分钟，之后打开封板膜，弃去液体，每孔加满稀释后的洗涤液，静置30s后弃去，重复5次； S9显色：每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，震荡混匀，5－37℃避光显色15分钟； S10终止：每孔加终止液50μL，终止反应； S11测定：加终止液的15min内，以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度。 5.根据权利要求4所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述样本采用血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织标本。 6.根据权利要求5所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述血清提取上清液具体操作为：在室温中将血液自然凝固10－20min，再离心15－20min，转速为2000－3000r/min，收集上血清。 7.根据权利要求5所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述血浆提取上清液具体操作为：在血浆中添加EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10－20min后，离心15－20min，转速为2000－3000r/min，收集上血清。 8.根据权利要求5所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述尿液提取上清液具体操作为：用无菌管收集，离心15－20min，转速为2000－3000r/min，收集上血清。 9.根据权利要求5所述的p16免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述细胞培养上清提取上清液具体操作为：检测分泌性时，用无菌管收集，离心15－20min，转速为2000－3000r/min，收集上血清。
所属类别：	发明专利