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原文传递一种p16免疫组化检测试剂盒

专利名称：	一种p16免疫组化检测试剂盒
摘要：	本发明涉及生物科技技术领域，具体为一种p16免疫组化检测试剂盒，包括一抗：冻干粉p16抗体；无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂10－15ml；试剂A：免疫组化封闭液；试剂B：生物素标记二抗工作液；试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液；棕色显色液D液1－2ml；白色显色液E液20－25ml；0.1M PBS缓冲液；柠檬酸钠抗原修复液；二氨基联本胺DAB染色液。本发明利用链霉亲和素－生物素信号放大技术生产的免疫组化检测试剂，具有高灵敏度，特异性强、定性定位准确、背景清晰、低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育时间短，适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片；可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳市森盈生物科技有限公司
发明人：	黄子权
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910806526.1
公开号：	CN110501498A
代理机构：	广州德伟专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	黄浩威;何文颖
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	518000 广东省深圳市南山区桃源街道龙珠三路南山睿园9栋4楼401
主权项：	1.一种p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒中包括以下试剂：一抗：冻干粉p16抗体；无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂10－15ml；试剂A：免疫组化封闭液；试剂B：生物素标记二抗工作液；试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液；棕色显色液D液1－2ml；白色显色液E液20－25ml； 0.1MPBS缓冲液；柠檬酸钠抗原修复液；二氨基联本胺DAB染色液。 2.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒的实验步骤具体如下： S1：制备一抗稀释液和DAB显色液； S2：将石蜡切片，并进行脱蜡至水； S3：蒸馏水冲洗，0.1MPBS缓冲液浸泡6－10min； S4：进行抗原修复； S5：采用3％－5％的无色双羊水去离子水孵育15－20min，消除内源性过氧物酶活性； S6：滴加蓝色试剂A免疫组化封闭液，室温孵育15－20min； S7：滴加S1中制备的一抗稀释液，35－37℃孵育2－3小时； S8：采用0.1MPBS缓冲液冲洗，每一分钟冲洗一次，三分钟冲洗三次，之后滴加黄色试剂B生物素标记二抗工作液，30－37℃孵育15－20min； S9：采用0.1MPBS缓冲液冲洗，每一分钟冲洗一次，三分钟冲洗三次，之后滴加橙色试剂C辣根酶标记链酶卵白素工作液，30－37℃孵育15－20min； S10：通过DAB显色液显色，并通过自来水充分冲洗； S11：进行复染、脱水、透明，之后选择适当的封片剂封片。 3.根据权利要求2所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述一抗稀释采用以下两种方法进行稀释： (1)将冻干粉p16抗体用0.1MPBS缓冲液稀释，将稀释后的抗体分装5－10支，20ulx5支或10ulx10支，放入－20℃保存； (2)将冻干粉p16抗体用0.1MPBS缓冲液稀释50ul成原液，再加50％甘油，放入－20℃保存。 4.根据权利要求2所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述柠檬酸钠抗原修复液的修复方法包括沸水浴修复、微波修复或高压修复。 5.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述DAB显色液的制备实验具体包括如下步骤：将1ml的白色显色液E液作为DAB底物液，之后加入1滴50ul的棕色显色液D液作为DAB浓缩液，混合均匀，制得DAB显色液。 6.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述免疫组化封闭液包括封闭用正常山羊血清工作液。 7.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述生物素标记二抗工作液采用生物素标记羊抗兔免疫球蛋白G、生物素标记山羊抗小鼠免疫球蛋白G或生物素标记羊抗兔、大鼠、小鼠和豚鼠免疫球蛋白G。 8.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述PBS缓冲液的酸碱度为pH7.2－7.4。 9.根据权利要求1所述的p16免疫组化检测试剂盒，其特征在于：所述PBS缓冲液也可采用无菌蒸馏水。
所属类别：	发明专利