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原文传递叶酸功能化的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒、其制备方法和应用

专利名称：	叶酸功能化的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒、其制备方法和应用
摘要：	本发明提供了一种叶酸功能化的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒，所述纳米颗粒为使用亲水性羧基化超顺磁性纳米颗粒以链霉亲和素修饰、进而结合生物素标记的偶联聚乙二醇的叶酸分子制得。还提供了该纳米颗粒的制备方法和应用。本发明所述的纳米颗粒成本低，生物相容性好，为在临床血液样品中的应用提供可能。另外，本发明不同于传统的靶向上皮细胞粘附分子的循环肿瘤细胞分离技术，叶酸功能化磁性纳米颗粒可捕获上皮细胞粘附分子表达受限、恶性程度较高的肿瘤细胞，提供了一种富集、分离和检测循环肿瘤的快速、准确和低成本的检测技术，为临床肿瘤转移患者的预后判断、疗效监测、转移复发监测、早期检测等提供了有效方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	国家纳米科学中心
发明人：	杨延莲;郑望舒;李平;刘长亮;王琛
专利状态：	有效
申请日期：	2018-05-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201810472017.5
公开号：	CN110501208A
代理机构：	北京市英智伟诚知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	刘丹妮
分类号：	G01N1/40(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	100190 北京市海淀区中关村北一条11号
主权项：	1.一种叶酸功能化的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒，其特征在于，所述纳米颗粒为使用亲水性羧基化超顺磁性纳米颗粒以链霉亲和素修饰、进而结合生物素标记的偶联聚乙二醇的叶酸分子制得。 2.根据权利要求1所述的纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1)羧基化磁性纳米颗粒的制备：将FeCl3·6H2O溶于乙二醇形成透明溶液后，加入无水乙酸钠与无水丙烯酸钠，加热剧烈搅拌，形成悬浮液后超声，加热超声后的悬浊液制得羧基化磁性纳米颗粒； (2)链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒的制备：将步骤(1)制得的羧基化磁性纳米颗粒转移至缓冲溶液中形成分散体系；将EDC和sulfo-NHS溶解于上述磁性纳米颗粒分散体系中对所述羧基化磁性纳米颗粒进行活化；洗涤所述活化后的磁性纳米颗粒重新分散于链霉亲和素溶液振荡反应，制得链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒； (3)叶酸功能化的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒的制备：将步骤(2)制得的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒分散于牛血清蛋白溶液中并生物素标记的偶联聚乙二醇的叶酸分子共同孵育，制得叶酸功能化的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述FeCl3·6H2O的乙二醇溶液浓度为0.05M～0.5M，优选为0.1M～0.2M，最优选为0.125M。 4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述加热温度为150～250℃，优选为180℃～220℃，最优选为200℃；所述加热时间为4～10小时，优选为6-9小时，最优选为8小时。 5.根据权利要求2至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中：所述缓冲溶液选自以下一种或多种：MES缓冲溶液，PBS缓冲溶液；优选为MES缓冲溶液；和/或所述链霉亲和素溶液的溶剂为PBS。 6.根据权利要求2至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述孵育温度为4℃～37℃，优选为4℃-25℃，最优选为4℃；所述孵育时间为1小时～16小时，优选为4小时-12小时，最优选为10小时。 7.根据权利要求1所述的纳米颗粒或按照权利要求2至6中任一项所述方法制备的纳米颗粒在制备用于循环肿瘤细胞捕获的药物和/或医疗产品中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肿瘤细胞为叶酸受体阳性的肿瘤细胞；优选地，所述肿瘤细胞选自以下一种或多种：卵巢癌肿瘤细胞、宫颈癌肿瘤细胞、三阴性乳腺癌肿瘤细胞、结肠癌肿瘤细胞、非小细胞肺癌肿瘤细胞。 9.一种基于叶酸受体的用于捕获循环肿瘤细胞的纳米材料，其特征在于，所述材料包含：根据权利要求1所述的、或按照权利要求2至6中任一项所述方法所制备的纳米颗粒；以及用于捕获所述循环肿瘤细胞的有需要的载体或辅料。 10.一种用于循环肿瘤细胞捕获的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括根据权利要求1所述的纳米颗粒或按照权利要求2至6中任一项所述方法制备的纳米颗粒。
所属类别：	发明专利