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原文传递一种蛋白质除盐方法及其应用

专利名称：	一种蛋白质除盐方法及其应用
摘要：	本发明涉及涉及一种蛋白质除盐方法及其应用。该蛋白质除盐方法包括以下步骤：(1)先用TFA溶解蛋白质样品，离心取上清；(2)用ACN润湿Zip Tip，再用TFA进行平衡；(3)采用步骤(2)中润湿和平衡后的Zip Tip数次吹吸使得步骤(1)中的样品至少通过吸附柱2次；再用冲洗液TFA进行冲洗；(4)再用洗脱液洗脱肽段；(5)SpeedVac抽干样品。本发明所提供的除盐方法，可以适用于经过磷酸化修饰富集处理的蛋白质中，克服了现有技术中除盐方法蛋白质损失大的问题，扩展了磷酸化修饰蛋白质组的应用范围，实现了磷酸化修饰蛋白质组从非标记到标记的跨越，将磷酸化修饰富集技术和标记技术更好地结合在了一起。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	武汉金开瑞生物工程有限公司
发明人：	赵海义;华权高;李立;陈亚运;赵慧芳;陶亦楠;舒芹;张雪娇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910804753.0
公开号：	CN110501409A
代理机构：	武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	严超
分类号：	G01N27/447(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	430000 湖北省武汉市东湖开发区高新大道666号武汉国家生物产业基地项目B、C、D区研发楼B1楼
主权项：	1.一种蛋白质除盐方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)先用TFA溶解蛋白质样品，离心取上清； (2)用ACN润湿Zip Tip，再用TFA进行平衡； (3)采用步骤(2)中润湿和平衡后的Zip Tip数次吹吸使得步骤(1)中的样品至少通过吸附柱2次；再用冲洗液TFA进行冲洗； (4)再用洗脱液洗脱肽段； (5)SpeedVac抽干样品。 2.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(1)中TFA与蛋白质样品的用量比例为：每100μg蛋白质用40-60μl 0.2％TFA溶液溶解。 3.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(1)中TFA的终浓度为0.1％-1％，pH＜4。 4.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(2)中的ACN的质量浓度为40-60％，TFA的质量浓度为0.05-0.15％。 5.根据权利要去1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(3)中冲洗液TFA的浓度为0.05-0.15％。 6.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，步骤(4)中洗脱液为含有40-60％ACN和0.05-0.15％TFA的混合液。 7.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)用0.2％TFA溶液溶解样品，TFA的终浓度为0.1-1％，pH＜4，离心取上清； (2)反复用50％ACN润湿液润湿Zip Tip，再用0.1％TFA平衡； (3)采用步骤(2)中润湿和平衡后的Zip Tip数次吹吸使得步骤(1)中的样品至少通过吸附柱2次；再用0.1％TFA冲洗液进行冲洗； (4)再用含有50％ACN和0.1％TFA的混合液洗脱肽段； (5)SpeedVac抽干样品。 8.根据权利要求1所述的一种蛋白质除盐方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)用0.2％TFA溶液溶解样品，TFA的终浓度为0.1-1％，pH＜4，离心取上清； (2)反复用50％ACN润湿液吹吸15次润湿Zip Tip，再用0.1％TFA洗吹10次平衡； (3)采用步骤(2)中润湿和平衡后的Zip Tip数次吹吸使得步骤(1)中的样品至少通过吸附柱2次；再用0.1％TFA冲洗液吹打5次进行冲洗； (4)再用含有50％ACN和0.1％TFA的混合液反复吹打15次洗脱肽段； (5)SpeedVac抽干样品。 9.如权利要求1所述的蛋白质除盐方法的应用，其特征在于，蛋白质经过磷酸化修饰肽富集处理后，再经过除盐处理，用于标记蛋白质组学的研究技术中。 10.根据权利要求9所述的蛋白质除盐方法的应用，其特征在于，标记蛋白质组学的研究技术为iTRAQ或TMT标记定量蛋白质组技术。
所属类别：	发明专利