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原文传递一种抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒及其检测方法

专利名称：	一种抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明公开了一种抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒及其检测方法，属于基因工程抗体分析检测技术领域，该试剂盒包括包被有抗原的酶标板和酶标抗体；所述抗原为FPV‑VLPS纯化抗原，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体。该检测方法包括：包被酶标板，绘制标准曲线，加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体，TMB显示，终止液终止，测定反应各孔OD450值，根据判定标准进行判断等步骤。本发明提供的试剂盒及其检测方法对抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体的检测具有非常高的敏感性、特异性及稳定性，为检测紧急免疫前后的动物体内抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体水平的研究提供有力支持。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	长春西诺生物科技有限公司
发明人：	石晶;李雪;殷玉和;赵健;金宏丽;张馨月
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-03T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910828147.2
公开号：	CN110501509A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	刘微
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	130000 吉林省长春市高新开发区普天路58号
主权项：	1.一种抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包被有抗原的酶标板和酶标抗体，所述抗原为FPV-VLPs纯化抗原，所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体。 2.如权利要求1所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述FPV-VLPs纯化抗原的工作浓度为2μg/mL。 3.如权利要求1所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体的稀释倍数为1:6000。 4.如权利要求1所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括封闭液和漂洗液，所述封闭液为包含2％BSA的PBS缓冲液，所述漂洗液为包含0.05％Tween-20的PBS缓冲液。 5.如权利要求1所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA试剂盒，其特征在于，所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体的包括鼠源可变区和猫源化恒定区，其重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其重链恒定区基因序列如SEQ ID NO.3所示，其轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，其轻链恒定区基因序列如SEQ ID NO.4所示。 6.一种抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、以制备的FPV-VLPs纯化抗原为包被抗原，用碳酸盐缓冲液稀释为2μg/mL包被酶标板； S2、标准品抗体用PBS稀释为0.25μg/mL，作为标准曲线起始浓度,之后2倍比稀释7个梯度，绘制标准曲线； S3、漂洗三次后，加入1:6000倍稀释的辣根过氧化物酶标记的山羊抗猫IgG抗体； S4、TMB显色，终止液终止，测定反应各孔OD450值，根据判定标准进行判断，其中终止液为2M的硫酸溶液。 7.如权利要求6所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA检测方法，其特征在于，步骤S1包被的温度为4℃，包被时间为12h。 8.如权利要求6所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA检测方法，其特征在于，步骤S1还包括对包被的酶标板进行封闭和漂洗的步骤，封闭过程具体为包含2％BSA的碳酸盐缓冲液在37℃下封闭2h，封闭过程结束后，加入包含0.05％Tween-20的PBS缓冲液洗涤三次。 9.如权利要求6所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA检测方法，其特征在于，步骤S4所述判定标准的确定方法如下：以一组阴性对照样品OD450的平均值加3倍标准差作为阳性阈值，以终点滴度表示，即将样品做连续稀释，最高稀释度能出现阳性反应者确定判定标准，阳性反应者的OD450＞阳性阈值或P/N≥2。 10.如权利要求6所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体ELISA检测方法，其特征在于，所述的抗猫细小病毒猫源化基因工程抗体包括鼠源可变区和猫源化恒定区，其重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其重链恒定区基因序列如SEQ ID NO.3所示，其轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，其轻链恒定区基因序列如SEQ ID NO.4所示。
所属类别：	发明专利