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原文传递一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法

专利名称：	一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法
摘要：	本发明属于分析测试技术领域，涉及一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法；具体包含温度偏移情况下探针信号的检测、荧光探针对温度偏移响应规律解析、以及探针有效工作温度的定量界定三个步骤；本发明通过解析荧光探针信号对温度正向偏移和负向偏移的响应规律，分别构建了荧光信号正向偏移幅度函数和荧光信号负向偏移幅度函数，实现了允许检测误差范围内荧光探针对应工作温度参数的精确界定，可为荧光探针在实际应用中的有效工作温度范围界定提供参考依据，从而实现待测分析物的高效、精准荧光法检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏大学
发明人：	石吉勇;李文亭;邹小波;黄晓玮;李志华;胡雪桃;郭志明;史永强;石海军
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-26T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910789120.7
公开号：	CN110618115A
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	212013 江苏省镇江市京口区学府路301号江苏大学
主权项：	1.一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法，其特征在于，包括如下步骤：温度偏移情况下探针信号的检测：对最佳工作温度为T0℃的荧光探针，设定其温度正向偏移幅度为ΔT1℃，温度负向偏移幅度为ΔT2℃；依次测量正向偏移幅度和负向偏移幅度内不同温度下对应荧光探针的荧光信号；荧光探针对温度偏移响应规律解析：将荧光探针在温度正向偏移和负向偏移幅度内不同温度下对应荧光信号与最佳工作温度T0℃对应的荧光信号相减并取绝对值得到荧光信号偏移幅值；以温度偏移幅度为自变量，以荧光信号偏移幅值为因变量，建立荧光信号正向偏移幅度函数Y＝F1(X)和负向偏移幅度函数V＝F2(U)；同时建立荧光信号正向偏移幅度函数的反函数X＝F1-1(Y)和负向偏移幅度函数的反函数U＝F2-1(V)；探针有效工作温度的定量界定：设定荧光信号正向和负向允许误差，以荧光探针最佳工作温度T0对应的荧光信号为基准点，计算荧光信号正向允许最大偏移幅度和负向允许最大偏移幅度；将荧光信号正向允许最大偏移幅度和负向允许最大偏移幅度分别代入信号正向偏移幅度函数的反函数和负向偏移幅度函数的反函数，计算荧光信号正向允许最大偏移幅度时对应的正向偏移温度T+和负向允许最大偏移幅度时对应的负向偏移时温度T-；由此确定荧光探针信号允许误差范围内对应的有效工作温度为T0-T-～T0+T+℃。 2.根据权利要求1所述的一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法，其特征在于，所述正向偏移幅度和负向偏移幅度内温度下对应荧光探针的荧光信号的检测方法具体如下：当温度正向偏移时，荧光信号检测次数为n+1，以单次增幅ΔT1/n℃，依次测量温度T0，T0+ΔT1/n，T0+2ΔT1/n，……，T0+(n-1)ΔT1/n，T0+nΔT1/n℃对应的荧光信号A0，A1，A2，……，An-1，An；当温度负向偏移时，荧光信号检测次数为m，以单次减幅ΔT2/m，依次测量温度T0-ΔT2/m，T0–2ΔT2/m，……，T0-(m-1)ΔT2/m，T0–mΔT2/m℃对应的荧光信号B1，B2，……，Bm-1，Bm；其中，n和m为大于0的整数。 3.根据权利要求1所述的一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法，其特征在于，所述荧光信号偏移幅值的计算方法如下：当温度正向偏移时，将温度T0+ΔT1/n，T0+2ΔT1/n，……，T0+(n-1)ΔT1/n，T0+nΔT1/n℃对应的荧光信号A1，A2，……，An-1，An与温度为T0的荧光信号A0相减并取绝对值，得到温度偏移幅度ΔT1/n，2ΔT1/n，……，(n-1)ΔT1/n，nΔT1/n℃对应的荧光信号偏移幅值\|A1-A0\|，\|A2-A0\|，……，\|An-1-A0\|，\|An-A0\|；当温度负向偏移时，将温度T0-ΔT2/m，T0–2ΔT2/m，……，T0-(m-1)ΔT2/m，T0–mΔT2/m℃对应的荧光信号B1，B2，……，Bm-1，Bm与温度为T0的荧光信号A0相减并取绝对值，得到温度偏移幅度ΔT2/m，2ΔT2/m，……，(m-1)ΔT2/m，mΔT2/m℃对应的荧光信号偏移幅值\|B1-A0\|，\|B2-A0\|，……，\|Bm-1-A0\|，\|Bm-A0\|；其中，n和m为大于0的整数。 4.根据权利要求1所述的一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法，其特征在于，所述正向偏移幅度函数Y＝F1(X)和负向偏移幅度函数V＝F2(U)的建立方法具体操作如下：当温度正向偏移时，以温度偏移幅度0，ΔT1/n，2ΔT1/n，……，(n-1)ΔT1/n，nΔT1/n为自变量X，以荧光信号偏移幅值0，\|A1-A0\|，\|A2-A0\|，……，\|An-1-A0\|，\|An-A0\|为因变量Y，建立荧光信号正向偏移幅度函数Y＝F1(X)；当温度负向偏移时，以温度偏移幅度0，ΔT2/m，2ΔT2/m，……，(m-1)ΔT2/m，mΔT2/m为自变量U，以荧光信号偏移幅值0，\|B1-A0\|，\|B2-A0\|，……，\|Bm-1-A0\|，\|Bm-A0\|为因变量V，建立荧光信号负向偏移幅度函数V＝F2(U)。 5.根据权利要求1所述的一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法，其特征在于，所述正向偏移幅度函数和负向偏移幅度函数通过Excel线性拟合得到。 6.根据权利要求1所述的一种荧光探针有效工作温度参数的界定方法，其特征在于，所述荧光信号正向允许最大偏移幅度和负向允许最大偏移幅度的计算方法如下：设定正向允许误差C1％，以荧光探针最佳工作温度T0对应的荧光信号A0为基准点，计算荧光信号正向允许最大偏移幅度ΔA1＝\|A0C1％\|；设定负向允许误差-C2％，以荧光探针最佳工作温度T0对应的荧光信号A0为基准点，计算荧光信号负向允许最大偏移幅度ΔA2＝\|-A0C2％\|。
所属类别：	发明专利