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原文传递一种抗癌药物的活性检测及筛选方法

专利名称：	一种抗癌药物的活性检测及筛选方法
摘要：	本发明公开了一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，具体涉及医疗技术领域，包括S1、配置MTT溶液；S2、配置三联溶解液；S3、制备癌细胞悬液；S4、接种；S5、加入MTT溶液；S6、加入三联溶解液；S7、吸光值测量；S8、设置调零孔和对照孔；S9、计算。本发明通过使用暖风扇将从药品柜内取出的三联溶解液的存放瓶进行吹拂，能够使得三联溶解液快速升温，加快了三联溶解液内部的SDS结晶的溶解效率，有效提高整体检测效率，同时暖风扇有效加快瓶外因温差产生的水珠的蒸发效率，有效防止人员在拿取三联溶解液的存放瓶时，因存放瓶表面的水珠意外进入三联溶解液的存放瓶内而影响检测的精度，进而有效保证整体检测的精度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	淄博职业学院
发明人：	付信宝
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910710174.X
公开号：	CN110618016A
代理机构：	北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	汤东凤
分类号：	G01N1/38(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	255314 山东省淄博市张店区联通路西首
主权项：	1.一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：具体步骤如下： S1、配置MTT溶液； S2、配置三联溶解液； S3、制备癌细胞悬液，制备具体步骤如下： S3.1、将新鲜的恶性肿瘤组织块用剪刀剪切成小块，然后使用生理盐水进行浸泡一段时间，然后再使用生理盐水进行洗涤； S3.2、将清洗后的恶性肿瘤组织块放入匀浆机内打散； S3.3、打散后的产物放入离心管中，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，然后加入适量红细胞裂解液，震荡后静置,然后再次使用离心机进行离心，离心后弃去上清液； S3.4、然后向产物中加入磷酸缓冲盐溶液进行冲洗，然后使用离心机进行离心，离心后弃去上清液，得到沉淀物，然后向沉淀物加入适量的保存液，从而制得癌细胞悬液； S4、接种：将癌细胞悬液接种于细胞培养板上，每孔100ul，放入培养箱中培养，从而使细胞单层铺满孔底部，然后加入抗癌药物； S5、加入MTT溶液：然后再放入培养箱中培养，然后利用显微镜观察，然后每孔加入10ulMTT溶液，继续放入培养箱中培养； S6、加入三联溶解液：将三联溶解液从药品柜内取出，同时使用暖风扇对其进行吹拂，使三联溶解液内的SDS结晶全部溶解，然后向细胞培养板的每个孔内加入100ul三联溶解液，然后再放入培养箱中继续培养； S7、吸光值测量：将细胞培养板从培养箱中取出，然后使用显微镜进行观察，当孔内的结晶物全部溶解后，使用酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值； S8、设置调零孔和对照孔：同时在细胞培养板上的孔内加入培养基、MTT溶液以及二甲基亚砜溶液设置成调零孔，在细胞培养板上的孔内加入细胞悬液、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT溶液以及二甲基亚砜设置为对照孔； S9、计算：将各孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值，然后OD值取平均数即得到细胞存活率，以此反映抗癌药物的活性，从而达到对抗癌药物进行筛选。 2.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S1中MTT溶液配置步骤具体如下： S1.1、先将混合瓶外端使用遮光膜包裹，然后称取MTT染料0.5g，然后将其与100ml磷酸缓冲盐溶液放入混合瓶中，摇匀混合，配置成浓度为5mg/ml的MTT溶液； S1.2、使用0.22μm的滤膜将MTT溶液中的细菌滤除，然后再次将MTT溶液放入包裹有遮光膜的混合瓶内，从而进行避光保存。 3.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S2中三联溶解液配置步骤具体如下： S2.1、准备10g SDS、5ml异丁醇以及0.1ml 10M浓度的HCl； S2.2、向SDS、异丁醇以及HCl中加入双蒸水，使其溶解配成100ml的三联溶解液； S2.3、将配置好的三联溶解液放于低温的药品柜内保存，保存温度为4℃。 4.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S3.1中使用生理盐水浸泡时间为40min-50min。 5.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S3.3中离心机转速为2000r/min,离心时间为10min-15min，加入适量红细胞裂解液震荡后静置时间为40min-50min。 6.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S3.4中离心机的转速为2000r/min,离心时间为10min-15min，离心后弃去上清液，重复此操作三次，最终得到沉淀物。 7.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S4中细胞培养板为96孔平底板，在步骤S4、步骤S5以及步骤S6培养箱中的培养环境为5％CO2和37℃的温度。 8.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S5中第一次培养箱的培养时间为30h-48h，第二次培养箱的培养时间为4h-5h。 9.根据权利要求1所述的一种抗癌药物的活性检测及筛选方法，其特征在于：在步骤S6中暖风扇的温度为60℃-70℃，培养箱的培养时间为6h-7h。
所属类别：	发明专利