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原文传递非洲猪瘟病毒表位抗原多肽及其应用

专利名称：	非洲猪瘟病毒表位抗原多肽及其应用
摘要：	本发明公开了一种非洲猪瘟病毒抗原表位多肽及其应用。非洲猪瘟病毒抗原表位多肽，为序列表中序列2所示的多肽或序列3所示的多肽。该抗原表位多肽组合物为序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽组成的组合物。本发明的抗原表位多肽或其组合物使用化学合成抗原肽包被酶标板制备成检测试剂盒，抗原用量少、灵敏性和特异性高，可以高效地检测是否存在感染非洲猪瘟病毒抗体；试剂盒具有敏感性高、特异性好、且操作便捷，具有良好的市场前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中牧实业股份有限公司
发明人：	董春娜;张欣;齐鹏;张蕾;吴冬荀;李静;肖进;李玲;王飞;向王震;李鹏宇
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910932716.8
公开号：	CN110618279A
代理机构：	北京惟诚致远知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	王慧凤
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100070 北京市丰台区南四环西路188号八区16-19号楼
主权项：	1.非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物，为序列表中序列2所示的多肽和序列表中序列3所示的多肽组成的组合物。 2.根据权利要求1所述非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物，其特征在于：序列2所示的多肽、序列3所示的多肽中的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)；优选的，它们的质量比为1：1。 3.非洲猪瘟病毒抗原表位多肽，为序列表中序列2所示的多肽或序列3所示的多肽。 4.一种非洲猪瘟病毒合成肽ELISA抗体检测试剂盒，包括酶联反应板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标二抗，其中所述酶联反应板包被有权利要求1或2所述的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物或者权利要求3所示的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽。 5.根据权利要求4所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述酶联反应板为可拆卸96孔酶标板；所述非洲猪瘟病毒抗原表位为化学人工合成得到。 6.根据权利要求4所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述酶联反应板的获得方法是将权利要求1或2所述的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物或者权利要求3所示的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽溶于100μl的pH 9.6的碳酸盐溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶联反应板，每孔150ng权利要求1或2所述的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物或者权利要求3所示的非洲猪瘟病毒抗原表位多肽，2～8℃下放置8～12小时，使非洲猪瘟病毒抗原表位多肽组合物与酶联反应板充分结合，然后按照300μl/孔加入含有0.01g/ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS缓冲液，37℃封闭处理2～3小时，甩干后，待酶联反应板干燥后4℃密封保存。 7.根据权利要求4所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照血清由以下步骤获得：1)分别原核表达非洲猪瘟主要抗原p30基因(如序列4所示)、p54基因(如序列5所示)和p72基因(如序列6所示)，制备三种抗原的重组蛋白；2)分别取所述重组蛋白p30、p54和p72进行免疫，制备高免血清作为试剂盒的阳性储备血清，经样品稀释液适当稀释后作为试剂盒阳性对照血清。 8.根据权利要求4所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述阴性对照血清为无特定病原体的猪血清；所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG抗体。 9.根据权利要求4所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括底物液A、底物液B和终止液；所述底物液A为含0.6mg/ml过氧化氢尿素的柠檬酸磷酸盐缓冲液，所述底物液B为0.2mg/ml的四甲基联苯胺溶液，使用时两者以1:1的比例混合；所述终止液为2mol/L的硫酸溶液。 10.根据权利要求4所述的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括样品稀释液和20倍浓缩洗涤液；样品稀释液为含有5mg/ml酪蛋白的0.01mol/L、pH值为7.4的磷酸盐缓冲液；浓缩洗涤液为含有体积百分浓度为0.8％～1.2％的Tween-20的0.01mol/L，pH值为7.4的磷酸盐缓冲液。
所属类别：	发明专利