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原文传递非洲猪瘟病毒快速检测卡及其应用

专利名称：	非洲猪瘟病毒快速检测卡及其应用
摘要：	本发明公开了一种非洲猪瘟病毒快速检测卡及其应用，旨在解决非洲猪瘟病毒检测难的技术问题。该检测卡的金标垫上吸附有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒p30、p54和p72蛋白的多克隆抗体PoAbI；检测膜上设有羊抗或兔抗小鼠IgG抗体或金黄色葡萄球菌SPA印制的质控线C，还设有抗非洲猪瘟病毒p30、p54和p72蛋白的多克隆抗体PoAbII印制的检测线T。设计一种非洲猪瘟病毒快速检测卡的使用方法：采集待检样本加PBS或水混悬或研磨；滴入所述非洲猪瘟病毒快速检测卡的加样端；水平放置观察结果。本发明的非洲猪瘟病毒快速检测卡采用双抗体夹心法，特异性强、敏感性高，检测效率高，高效实用，具有重要的实际应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南中泽生物工程有限公司
发明人：	王爱萍;陈玉梅;赵建国;刘运超;邢广旭;孙亚宁;冯景
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910088471.5
公开号：	CN109781980A
代理机构：	河南科技通律师事务所
代理人：	张晓辉;樊羿
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	451162 河南省郑州市航空港区迎宾路南侧4号楼1-2层
主权项：	1.一种非洲猪瘟病毒快速检测卡，包括试纸条，所述试纸条包括支撑板和固定在所述支撑板上的吸附层，所述吸附层从测试端开始依次为样品垫、金标垫、检测膜和吸水垫，其特征在于，所述金标垫上吸附有胶体金标记的抗非洲猪瘟病毒p30、p54和p72蛋白的多克隆抗体PoAbI；所述检测膜上设有羊抗或兔抗小鼠IgG抗体或金黄色葡萄球菌SPA印制的质控线C，还设有含抗非洲猪瘟病毒p30、p54和p72蛋白的多克隆抗体PoAbII的检测线T。 2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡，其特征在于，所述多克隆抗体PoAbI由以下步骤制得：（1）分别原核表达核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的p30基因、核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的p54基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的p72基因，制备非洲猪瘟病毒p30、p54和p72重组蛋白；（2）分别取所述重组p30、p54和p72蛋白免疫兔；（3）高免血清辛酸-硫酸铵法纯化获得多克隆抗体PoAbI的IgG。 3.根据权利要求2所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡，其特征在于，在所述步骤（2）中，动物免疫时每只兔的剂量为100～200μg/1ml 重组p30蛋白，100～200μg/1ml 重组p54蛋白，100～200μg/1ml 重组p72蛋白。 4.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡，其特征在于，所述多克隆抗体PoAbI的ELISA效价为1：2×103～1：2×107。 5.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡，其特征在于，所述多克隆抗体PoAbII经以下步骤制得：（1）分别原核表达核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的p30基因、核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示的p54基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的p72基因，制备非洲猪瘟病毒p30、p54和p72重组蛋白；（2）分别取所述重组p30、p54和p72蛋白免疫鼠；（3）高免血清辛酸-硫酸铵法纯化获得多克隆抗体PoAbII的IgG。 6.根据权利要求5所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡，其特征在于，在所述步骤（2）中，动物免疫时每只鼠的剂量为50～100μg/500ml 重组p30蛋白，50～100μg/500ml 重组p54蛋白，50～100μg/500ml 重组p72蛋白。 7.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡，其特征在于，所述多克隆抗体PoAbII的ELISA效价为1：3.2×104到1：8.192×106。 8.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡，其特征在于，所述支撑板由不吸水的韧性PVC材料制成；所述样品垫由玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述金标垫由玻璃纤维棉制成；所述检测膜由硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；所述吸水垫由吸水滤纸制成。 9.权利要求1所述非洲猪瘟病毒快速检测卡的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）采集待检样本，加PBS或水混悬或研磨，得待检溶液；（2）将所述待检溶液滴入权利要求1所述非洲猪瘟病毒快速检测卡的加样端；水平放置3min～6 min观察结果；（3）若检测卡的质控线C和检测线T显现两条红棕色条带，表示待检样品中含有ASFVp30蛋白、p54蛋白、p72蛋白抗原中的至少一种；若仅检测卡的质控线C显现一条红棕色条带，表示待检样品未检出ASFV p30蛋白和/或p54蛋白和/或p72蛋白抗原；若检测卡未显现任何条带表明检测操作不当或检测卡失效。 10.根据权利要求9所述的非洲猪瘟病毒快速检测卡的使用方法，其特征在于，所述样本为猪血清、病猪组织、死猪组织、粪便、疫苗、体液中的任意一种。
所属类别：	发明专利