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原文传递一种三维细胞纸芯片传感器及在细菌脂多糖检测中的应用

专利名称：	一种三维细胞纸芯片传感器及在细菌脂多糖检测中的应用
摘要：	本发明公开了一种三维细胞纸芯片传感器及在细菌脂多糖检测中的应用，属于分析检测技术领域。本发明通过将喷蜡打印技术、丝网印刷技术、细胞三维培养技术和电化学传感技术相结合构建一种新型三维细胞纸芯片传感器，同时具备纸芯片的低成本和便携式、细胞三维培养的真实性、电化学分析的高灵敏性和快速性，能准确地进行低含量脂多糖的检测。本发明还公开了该三维细胞纸芯片传感器的制备方法以及应用，可实现对食源性致病菌的间接检测及毒力判定，具有灵敏、高效、微型化等优点，并且价格低廉，适用于已知致病菌的检测及未知致病菌的毒力判定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	南京市食品药品监督检验院
发明人：	蒋卉;杨军;万凯
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-23T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910898117.9
公开号：	CN110632160A
代理机构：	哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：	张勇
分类号：	G01N27/48(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	210000 江苏省南京市江宁区文芳路199号
主权项：	1.一种三维细胞纸芯片，其特征在于，包括参比电极、对比电极、工作电极；所述工作电极上功能化修饰聚吡咯/氧化石墨烯-Nafion，且三维细胞培养系统固定在所得的功能化修饰纸芯片工作电极上；所述三维细胞培养系统是含有密度为103-107个/mL细胞的三维水凝胶-细胞复合物。 2.根据权利要求1所述的三维细胞纸芯片，其特征在于，所述功能化修饰聚吡咯/氧化石墨烯-Nafion是在纸芯片工作电极上滴加吡咯单体、氧化石墨烯与氯化钾混合溶液，待纸芯片亲水区完全吸收溶液后，利用工作电极、参比电极和对电极形成电回路，进行电聚合，再滴加Nafion溶液于工作电极，实现聚吡咯/氧化石墨烯-Nafion修饰。 3.根据权利要求1或2所述的三维细胞纸芯片，其特征在于，所述三维细胞培养系统具体是将密度为103-107个/mL细胞与海藻酸钠溶液混匀，滴加于工作电极表面，再滴加CaCl2/DMEM溶液，钙浴后形成三维水凝胶-细胞复合物，待细胞固定后除去未固定上的细胞，即得三维细胞培养系统。 4.根据权利要求3所述的三维细胞纸芯片，其特征在于，所述海藻酸钠溶液是将海藻酸钠溶解于DMEM中，混合液超声处理得到均匀的分散溶液。 5.一种三维细胞纸芯片传感器，其特征在于，所述传感器包括权利要求1-4任一所述的三维细胞纸芯片、硬质电极夹具。 6.根据权利要求5所述的三维细胞纸芯片传感器，其特征在于，用硬质电极夹具夹好检测芯片，连接电化学工作站，即得到三维细胞纸芯片传感器。 7.权利要求1-4任一所述的三维细胞纸芯片或者权利要求5-6任一所述的三维细胞纸芯片传感器在检测领域中的应用。 8.一种测定革兰氏阴性菌脂多糖含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1)标准曲线构建：将已知浓度的脂多糖标准品分别滴加到权利要求1-4任一所述的三维细胞纸芯片传感器的三维细胞培养系统中进行孵育，并采用差分脉冲伏安法测定电流，利用脂多糖浓度与电流值构建线性模型，得到脂多糖标准品浓度对数值与电流值的标准曲线； (2)待测样测试：处理菌株，提取得到待测的脂多糖样品，然后滴加到权利要求1-4任一所述的三维细胞纸芯片的三维细胞培养系统中，采用差分脉冲伏安法测得电流值，再根据步骤(1)得到的标准曲线，定量菌株脂多糖浓度。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述脂多糖标准品是肠炎沙门氏菌来源脂多糖标准样品。 10.权利要求8或9所述的方法在革兰氏阴性菌脂多糖毒力评价方面的应用。
所属类别：	发明专利