详情

原文传递一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法

专利名称：	一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法
摘要：	本发明提供一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，在烟草样品中加入内标样品后，加入溶剂进行萃取、离心、过滤后获得样品溶液；再将样品溶液采用两维液相色谱质谱联用法进行测定，通过质谱对样品溶液中的蔗糖酯成分和内标样品进行定性，通过标准曲线法对样品溶液中内标样品进行定量，再确定样品溶液中与定量确定的内标样品结构相似的蔗糖酯成分的相对含量。本发明进一步提供的一种多维液相色谱质谱联用分析系统及其使用方法。本发明提供的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，能够有效去除烟草中影响蔗糖酯定量的干扰物质，具有准确度高、重现性好、检测限低的特点，且仪器自动化完成，适应于烟草样品的批量检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海烟草集团有限责任公司
发明人：	陈敏;董惠忠;刘百战;吴达
专利状态：	有效
申请日期：	2019-10-31T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201911051738.X
公开号：	CN110632220A
代理机构：	上海光华专利事务所(普通合伙)
代理人：	许亦琳;余明伟
分类号：	G01N30/06(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	200082 上海市杨浦区长阳路717号
主权项：	1.一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，包括以下步骤： 1)在烟草样品中加入内标样品后，加入溶剂进行萃取、离心、过滤后获得样品溶液； 2)将样品溶液采用两维液相色谱质谱联用法进行测定，通过质谱对样品溶液中的蔗糖酯成分和内标样品进行定性，通过标准曲线法对样品溶液中内标样品进行定量，再确定样品溶液中与定量确定的内标样品结构相似的蔗糖酯成分的相对含量。 2.根据权利要求1所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述烟草中蔗糖酯成分包括有以下成分：蔗糖酯SE-1、蔗糖酯SE-2、蔗糖酯SE-3、蔗糖酯SE-4、蔗糖酯SE-5、蔗糖酯SE-6。 3.根据权利要求1所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，步骤1)中，包括以下条件中的任一项或多项： A1)所述内标样品为单葵酸蔗糖酯； A2)所述烟草样品加入的质量g与内标样品加入的体积mL之比为20：5-15； A3)所述溶剂为乙腈； A4)所述烟草样品加入的质量g与溶剂加入的体积mL之比为0.2：4-6； A5)所述超声萃取的时间为10-40min； A6)所述离心条件为：转速为1000-3000r/min；时间为5-15min。 4.根据权利要求1所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，步骤2)中，所述两维液相色谱质谱联用法进行测定，是通过第一维液相色谱分离出目标组分，目标组分经补液稀释后进入捕集柱捕集，再将捕集柱捕集成分洗脱后由第二维液相色谱进行分离，通过质谱进行定性。 5.根据权利要求4所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述第一维液相色谱的测定条件为：第一分离柱：C18色谱柱；柱温：25-35℃；进样量：1-10μL；流速：0.1-0.3mL/min；检测波长：205-215nm；流动相A相：含0.05-0.1％甲酸的水；流动相B相：含0.05-0.1％甲酸的甲醇；梯度洗脱。 6.根据权利要求5所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述第一维液相色谱的梯度洗脱的具体程序为： 0-1min，A相：B相体积比为50：50-50：50； 1-5min，A相：B相体积比为50：50-30：70； 5-13min，A相：B相体积比为30：70-0：100； 13-25min，A相：B相体积比为0：100-0：100； 25-25.1min，A相：B相体积比为0：100-50：50； 25.1-35min，A相：B相体积比为50：50-50：50。 7.根据权利要求4所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述捕集柱的捕集条件为：捕集柱：DIONEX Acclaim PolarAdvantageII捕集柱，4.6mm×10mm，5μm；补偿泵流动相：纯水；柱温：25-35℃；补偿泵流动相流速范围为0.1-1mL/min。 8.根据权利要求7所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述补偿泵流动相流速设置程序为： 0-7min，保持0.1mL/min； 7-8min，由0.1mL/min改变为1mL/min； 8-16min，保持1mL/min； 16-16.5min，由1mL/min改变为0.1mL/min。 9.根据权利要求4所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述第二维液相色谱的测定条件为：第二分离柱：C18色谱柱；柱温：25-35℃；进样量：1-10μL；流速：0.2-0.4mL/min；检测波长：205-215nm；流动相A相：含0.05-1％甲酸的水；流动相B相：含0.05-1％甲酸的乙腈；梯度洗脱。 10.根据权利要求9所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述第二维液相色谱的梯度洗脱的具体程序为： 0-15min，A相：B相体积比为95：5-95：5； 15-20min，A相：B相体积比为95：5-50：50； 20-30min，A相：B相体积比为50：50-35：65； 30-30.1min，A相：B相体积比为35：65-5：95； 30.1-39min，A相：B相体积比为5：95-5：95； 39-39.1min，A相：B相体积比为5：95-95：5； 39.1-40min，A相：B相体积比为95：5-95：5。 11.根据权利要求4所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，所述质谱的测定条件为：质谱：ABI 5500三重四级杆质谱仪；电离方式：电喷雾离子源ESI，正离子扫描，多反应检测MRM模式；电喷雾电压：5000V；离子源温度：350℃；离子对的驻留监测时间：20ms；气帘气压力：20Psi；碰撞气：Medium；碰撞池出口电压CXP：13V；质谱扫描时间：18-30min。 12.根据权利要求1所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，步骤2)中，所述标准曲线法对样品溶液中内标样品进行定量， A)将一系列不同体积的内标样品加入溶剂稀释后定容，配制成一系列不同浓度的内标溶液，分别进行LC-LC-MS分析，获得内标溶液中内标样品的色谱峰面积与相应内标样品的浓度的线性关系，绘制相应的标准工作曲线，计算得到内标样品的标准工作曲线的回归方程； B)将样品溶液进行LC-LC-MS分析，将获得的样品溶液中内标样品的色谱峰面积代入步骤A)中内标样品的标准工作曲线的回归方程，并根据内标溶液中内标样品的已知浓度，计算得到样品溶液中内标样品的含量。 13.根据权利要求1所述的一种多维液相色谱质谱联用分析烟草中蔗糖酯的方法，其特征在于，步骤2)中，所述样品溶液中与定量确定的内标样品结构相似的蔗糖酯成分的相对含量，是根据LC-LC-MS分析获得的样品溶液中蔗糖酯成分的色谱峰面积，分别代入与其结构相似的定量确定的内标样品的标准工作曲线中，计算得到样品溶液中蔗糖酯成分的相对含量。 14.一种多维液相色谱质谱联用分析系统，其特征在于，包括第一维液相色谱、补偿泵(2)、连通接口(3)、捕集柱(4)、切换阀(5)、第二维液相色谱、质谱(7)，所述第一维液相色谱包括有一维泵(11)、一维色谱柱(12)，所述第二维液相色谱包括有二维泵(61)、二维色谱柱(62)；所述一维泵(11)与一维色谱柱(12)相连，所述二维色谱柱(62)的出样端经管线与质谱(7)相连，所述连通接口(3)经管线分别与一维色谱柱(12)的出样端、补偿泵(2)、切换阀(5)相连，所述切换阀(5)还经管线分别与二维泵(61)、二维色谱柱(62)的进样端、捕集柱(4)的进样端及出样端相连。 15.根据权利要求14所述的一种多维液相色谱质谱联用分析系统的使用方法，包括以下步骤： a)打开第一维液相色谱，样品溶液在一维泵引入的第一流动相带动下，流入一维色谱柱进行初步分离得到目标组分，目标组分流入连通接口的第1接口，同时，通过补偿泵引入的补偿流动相流入连通接口的第2接口，使目标组分与补偿流动相混合，降低目标组分中的有机相比例； b)打开切换阀，将步骤a)获得的目标组分经连通接口的第3接口流出后，由切换阀的第6接口进入，经切换阀的第1接口进入捕集柱中进行捕集，捕集目标组分后的废液经切换阀的第4接口，由切换阀的第5接口排出； c)打开第二维液相色谱，将二维泵引入的第二流动相经切换阀的第2接口流入，经切换阀的第1接口进入捕集柱中将捕集的目标组分洗脱，洗脱液经切换阀的第4接口切换至第3接口流入二维色谱柱进行二次分离； d)打开质谱，步骤c)中获得的分离液流入质谱进行测定。
所属类别：	发明专利