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原文传递基于核酸适配体检测沙门氏菌的生物传感器及其制备方法和应用

专利名称：	基于核酸适配体检测沙门氏菌的生物传感器及其制备方法和应用
摘要：	本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于核酸适配体检测沙门氏菌的生物传感器，基于核酸适配体与目标物的特异性识别，将发夹探针HAP打开，利用支点介导的链置换反应，将S1从复合探针S上置换下来，置换下来的S可以通过催化发夹自组装（CHA）放大方式使得形成G‑四联体的序列暴露出来，在存在血红素时形成G‑四联体/血红素DNA酶。运用G‑四联体/血红素类辣根过氧化物酶的催化性能来将半胱氨酸氧化成胱氨酸，无法实现半胱氨酸与银簇之间的通过金硫键的电荷转移，从而调控荧光信号传导，从而构建了适体生物传感器，该传感器反应只需要一步，因此具有检测速度快，操作简便，价格低廉，检测限低，特异性高等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	王玉;王海旺;王敬锋;李莎莎;刘素;黄加栋;张儒峰;赵一菡;瞿晓南;张雪;宋晓蕾
专利状态：	有效
申请日期：	2019-09-20T00:00:00+0800
发布日期：	2019-12-31T00:00:00+0800
申请号：	CN201910890363.X
公开号：	CN110632300A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	李桂存
分类号：	G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种检测沙门氏菌的生物传感器，其特征在于，包括发夹探针HAP、复合探针S、核酸链S2、核酸链C、发卡探针H1、发卡探针H2、发卡探针H3、半胱氨酸、血红素、沙门氏菌和缓冲液；所述的复合探针S，由S0探针、S1探针1：2杂交成的双链；所述的HAP碱基系列如SEQ No.1所示；所述的S0碱基系列如SEQ No.2所示；所述的S1碱基系列如SEQ No.3所示；所述的S2碱基系列如SEQ No.4所示；所述的H1碱基系列如SEQ No.5所示；所述的H2碱基系列如SEQ No.6所示；所述的H3碱基系列如SEQ No.7所示；所述的C碱基系列如SEQ No.8所示。 2.权利要求1所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）复合探针S的构建；（2）DNA银纳米簇AgNCs-DNA的合成；（3）均相反应：将沙门氏菌与发夹探针HAP、复合探针S、核酸链S2、H1、H2、H3、AgNCs-DNA、半胱氨酸、血红素、缓冲液，混和均匀后孵育；（4）荧光仪检测荧光强度。 3.根据权利要求2所述的所述的检测沙门氏菌的方法，其特征在于，步骤（1）复合探针S的构建步骤如下：将灭菌水、10×PB、S0探针和S1探针，震荡30s，在95℃下孵育5min，缓慢冷却至室温杂交为探针，储存于-20 ℃备用。 4.根据权利要求2所述的所述的检测沙门氏菌的方法，其特征在于，所述的步骤（2）DNA银纳米簇AgNCs-DNA的合成，操作步骤如下：将核酸链C和PB缓冲液混合，然后再加入AgNO3溶液，震荡1 min，于4 ℃下放置30 min；加入 NaBH4，震荡1 min，于4 ℃下黑暗放置6h以上即得。 5.根据权利要求2所述的所述的检测沙门氏菌的方法，其特征在于，所述的步骤（3）均相反应操作步骤如下：将沙门氏菌、发夹探针HAP、复合探针S、核酸链S2、H1、H2、H3、AgNCs-DNA、半胱氨酸、血红素、缓冲液混合，震荡30s，于37℃下水浴90 min。 6. 根据权利要求2所述的所述的检测沙门氏菌的方法，其特征在于，所述的步骤（4）荧光仪设置激发波长为570 nm。 7.权利要求1所述的生物传感器用于检测食品和水中的沙门氏菌。
所属类别：	发明专利