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原文传递一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法

专利名称：	一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法
摘要：	本发明公开了一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，包括以下步骤：（1）无菌条件下取待测样品，加入含Al(OH)3的PBS缓冲液中，均质，获得样品菌液；（2）对样品菌液进行水浴热处理，离心，弃上清，收集菌体；（3）向菌体中加入小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠，振荡后于磁力架上静置分层，弃上层，得到吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠；用洗脱液对吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠进行洗脱，然后向洗脱后的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，混合均匀，得到样品待测液；（4）将待测样品液进行培养、观察、检测。本发明提供的检测方法特异性强，灵敏度高，而且能有效缩短检测时间，降低检测成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河南;41
申请人：	河南省商业科学研究所有限责任公司
发明人：	周莉;王潇;李栋;蒋碧伟;高瑞;吴晶晶;王春杰;李永利;毛晓娜;张立攀;关炳峰;平洋;张亚勋;谭静;任钊
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201910137165.6
公开号：	CN109696546A
代理机构：	郑州翊博专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	周玉青;付红莉
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	450002 河南省郑州市金水区文化路87号
主权项：	1.一种检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）无菌条件下取待测样品，加入含Al(OH)3的PBS缓冲液中，均质，获得样品菌液；（2）对样品菌液进行水浴热处理，然后离心，弃上清，收集菌体；（3）向菌体中加入小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠，经混合、振荡后于磁力架上静置分层，弃上层，得到吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠；用洗脱液对吸附有菌体的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠进行洗脱，然后向洗脱后的小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠中加入PBS缓冲液，混合均匀，得到样品待测液；（4）将待测样品液进行培养、观察、检测。 2.根据权利要求1所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，步骤（1）中所述待测样品与PBS缓冲液的质量比为1:9，所述PBS缓冲液中Al(OH)3的质量浓度为0.5%～10%。 3.根据权利要求1所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，步骤（2）中所述水浴热处理的温度为30℃～80℃，水浴时间为5min～30min。 4.根据权利要求1-3任一所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，步骤（2）中所述离心温度为4℃，转速为4000rpm，离心时间为1 min～5min。 5.根据权利要求4所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，步骤（3）中所述振荡时间为1 min～3min。 6.根据权利要求5所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，步骤（1）中所述PBS缓冲液的浓度为0.02mol/L；步骤（3）中所述洗脱液为0.02mol/L的PBS缓冲液，洗脱次数为2～3次。 7.根据权利要求1或2或3或5或6所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，步骤（3）中所述小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠是通过链霉亲和素修饰磁珠后偶联生物素标记的小肠结肠炎耶尔森氏菌抗体制得。 8.根据权利要求7所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，所述小肠结肠炎耶尔森氏菌免疫磁珠的具体制备方法，包括以下步骤： a）用0.01mol/L磷酸盐-吐温20缓冲液稀释小肠结肠炎耶尔森氏菌抗体至1mg/ml；用无水二甲基亚砜配制10mg/ml生物素N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液，将稀释后的小肠结肠炎耶尔森氏菌抗体与生物素N-羟基琥珀酰亚胺酯溶液按体积比为1:3.3进行混合，室温下孵育，即得生物素标记的小肠结肠炎耶尔森氏菌抗体； b）向生物素标记的小肠结肠炎耶尔森氏菌抗体中加入1mg已活化溶解的链霉亲和素修饰磁珠进行混合，得到抗体与磁珠的混合物，室温放置； c）向步骤b）制得的混合物中加入7.8μL 1mol/L NH4Cl溶液，室温孵育；上1ml的分子筛柱，以PBS缓冲液洗脱，收集1ml/管，加入PBS缓冲液与0.01%叠氮钠的混合液，置-20℃避光保存。 9.根据权利要求8所述的检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法，其特征在于，步骤a）中所述磷酸盐-吐温20缓冲液的pH值为6.5。
所属类别：	发明专利