详情

原文传递一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法

专利名称：	一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法
摘要：	本发明涉及一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，包括如下步骤：配制12种多酚类标准物质的标准溶液、样品处理、样品UPLC‑MS‑MS分析和计算。本发明方法测定的12种多酚的回收率介于84.7%~102%，相对标准偏差1.9%~5.7%，定量限介于0.5~8.0μg/g之间，该方法灵敏、准确，适用于新鲜烟叶中12种多酚的含量分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	云南;53
申请人：	云南中烟工业有限责任公司
发明人：	宋春满;邓乐乐;向海英;高茜;曾婉俐;李雪梅;陈章玉
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-04-30T00:00:00+0800
申请号：	CN201811544051.5
公开号：	CN109696514A
代理机构：	昆明正原专利商标代理有限公司
代理人：	金耀生;亢能
分类号：	G01N30/96(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	650231 云南省昆明市红锦路367号
主权项：	1.一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤（1）、配制12种多酚类标准物质的标准溶液步骤（2）、样品处理准确称取一定量冻干烟叶粉末，加入50%甲醇，超声后离心，取上清液经滤膜过滤后上机分析；步骤（3）、样品UPLC-MS-MS分析分析条件如下：色谱柱：Acquity HSS T3柱，2.1×100 mm，1.7µm；流动相：A为含0.1%甲酸的水，B为甲醇；洗脱程序：0 min 10% B，10 min 25% B，13 min 100% B，13.5 min 100% B，14 min 10%B，16 min 10% B；流速：0.4 mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL；质谱电离方式：电喷雾电离模式；监测方式：多反应监测；喷雾电压：3000 V；雾化气流速：750 L/h；辅助气流速：50 L/h；离子源温度：120 ℃；步骤（4）、计算根据步骤（1）配制的12种多酚化合物不同浓度的混合标准溶液，采用加权回归法，得出各种多酚的工作曲线及其相关系数；对提取后的样品待测液进行测定，测得多酚化合物的定量离子对峰面积，代入标准曲线求得样品中的多酚化合物的含量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，12种多酚类标准物质为咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭、香豆素、新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、绿原酸、隐绿原酸和芸香苷，分别称取12种多酚类标准物质0.1 g至100 mL容量瓶中，精确至0.0001g，用甲醇定容，配制成浓度为1000μg/mL的单一标准储备液。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭、香豆素4种单一标准储备液各1 mL至20 mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为50 μg/mL 的4种低含量多酚的混合储备液。 4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷5种单一标准储备液各5 mL至50 mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为100 μg/mL 的5种中等含量多酚的混合储备液。 5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取绿原酸、隐绿原酸、芸香苷3种单一标准储备液各10mL至50mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为200 μg/mL的3种高含量多酚混合储备液。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，准确称取25mg冻干烟叶粉末，加入5mL 50%体积浓度的甲醇，超声20min，12000r/min离心5min，取上清液经0.22μm滤膜过滤后上机分析。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，12种多酚化合物的检测参数如表1所示：表1测定的多酚种类及检测参数。
所属类别：	发明专利