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原文传递一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法

专利名称：	一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法
摘要：	本发明涉及化学测试分析技术领域，涉及一种可视化检测黄曲霉毒素B1的检测方法。将样品提取液加入到检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中反应后，所得的产物用洗涤液进行磁场清洗，然后加入A液和B液进行反应，再加入终止液停止反应；用所述检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中黄曲霉素B1标准比色卡进行比对，得到待测样品黄曲霉素B1的含量或范围值。该检测工艺具有灵敏、简单、便携、可实时检测的优点，不仅可以通过肉眼来完成目标物的定性检测，还能通过酶标仪测试显色溶液的吸光值进行定量分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖北;42
申请人：	湖北工业大学
发明人：	吴龙;徐歆;陈小强;祝琳;周敏
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910037557.5
公开号：	CN109709322A
代理机构：	上海硕力知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	郭桂峰
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	430068 湖北省武汉市洪山区南李路28号
主权项：	1.一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，包括：步骤50、将样品提取液加入到检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中反应后，所得的产物用洗涤液进行磁场清洗，然后加入A液和B液进行反应，再加入终止液停止反应；步骤51、用所述检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中黄曲霉素B1标准比色卡进行比对，得到待测样品黄曲霉素B1的含量或范围值。 2.如权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于：所述步骤50中，所述的将样品提取液加入到检测食品中黄曲霉素B1的试剂盒中反应是指在室温下反应，其反应时间为40～60min；所述的磁场清洗次数至少为3次；所述的加入所述A液和所述B液进行反应的反应时间为10～40min。 3.如权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，在所述步骤50之前还包括：步骤011、将固体样品去皮粉碎，加入甲醇水溶液和石油醚，振荡，用滤纸过滤于分液漏斗中，静置分层，下层为固体样品的样品提取液；或，步骤021、称取液体样品于小烧杯中，用蒸馏水转移到分液漏斗中，加入三氯甲烷，加塞轻轻振摇，静置分层，然后放出下层三氯甲烷层，经盛有约预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4的快速定性滤纸过滤于蒸发皿中，再加三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，水溶通风挥干；挥干冷却后，用甲醇溶解得液体样品的样品提取液。 4.如权利要求1所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，在所述步骤50之前还包括：步骤03、称取磷酸二氢钾，十二水合磷酸氢二钠，氯化钠和氯化钾，将称量的药品倒入烧杯中加水溶解，然后加入吐温20，将配制的溶液转移至容量瓶中，加蒸馏水定容后得到所述洗涤液；步骤04、称取醋酸钠、柠檬酸，然后加入双氧水定容，则得到所述A液；步骤05、取3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶于二甲基亚砜，后加入乙二胺四乙酸二钠，柠檬酸和甘油，用超纯水或蒸馏水或去离子水定容得到所述B液；步骤06、量取蒸馏水于试剂瓶中，缓慢加入浓硫酸，静置超声混匀，得到所述终止液。 5.如权利要求4所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于：在所述步骤03中，磷酸二氢钾在所述洗涤液中的质量体积比为0.2g/L；十二水合磷酸氢二钠在所述洗涤液中的质量体积比为2.9g/L；氯化钠在所述洗涤液中的质量体积比为8.0g/L；氯化钾在所述洗涤液中的质量体积比为0.2g/L；吐温20与所述洗涤液的体积比为1：2000；在所述步骤04中，醋酸钠在所述A液中的质量体积比为5.44g/200mL；柠檬酸在所述A液中的质量体积比为0.64g/200mL；所述双氧水的浓度为30％；在所述步骤05中，3,3',5,5'-四甲基联苯胺与所述B液的质量体积比为0.06g/200mL；乙二胺四乙酸二钠与所述B液的质量体积比为0.08g/200mL；柠檬酸与所述B液的质量体积比为0.38g/200mL；甘油、二甲基亚砜与所述B液体积比为1：0.03：10；在所述步骤06中，浓硫酸的浓度为98％，浓硫酸与所述终止液的体积比为108.5：1000；所述静置的时间为30min；所述超声的时间为10min。 6.如权利要求1～5中任意一项所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，所述试剂盒包括：黄曲霉素标准比色卡，用于确定样品黄曲霉素B1的含量或范围；反应板，用于存放铂金二氧化硅纳米微球信号标签和四氧化三铁纳米微球捕获剂的混合液；盒子，装配在所述反应板底部；磁铁，放置于所述盒子内部。 7.如权利要求6所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，制备所述铂金二氧化硅纳米微球信号标签包括：步骤10、将四氯金酸和柠檬酸三钠用去离子水定容后加入硼氢化钠溶液搅拌后获得金纳米粒子，将所述金纳米粒子离心洗涤后分散在水中，得到金纳米粒子溶液；步骤11、将三乙胺加入水搅拌后，加入十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸，正硅酸乙酯反应后，再加入盐酸甲醇溶液反应，取以上配置而成的部分溶液加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，搅拌后得到氨基化二氧化硅纳米微球，将所述氨基化二氧化硅纳米微球离心清洗取沉淀后分散在水中，得到氨基化二氧化硅纳米微球溶液；步骤12、将所述氨基化二氧化硅纳米微球加入所述金纳米粒子溶液，超声搅拌反应，得到红色的金二氧化硅纳米微球；步骤13、将所述红色的金二氧化硅纳米微球离心洗涤后分散在水中，得到红色的金二氧化硅纳米微球溶液，在所述红色的金二氧化硅纳米微球溶液中加入氯铂酸后搅拌再加入硼氢化钠溶液反应，获得铂金二氧化硅纳米微球，分散到水中，得到铂金二氧化硅纳米微球溶液；步骤14、取戊二醛原液加入到所述铂金二氧化硅纳米微球溶液孵育，将反应所得的溶液离心洗涤，分散到水中，得到戊二醛修饰过的铂金二氧化硅纳米微球溶液，再加入氨基化修饰的适配体DNA互补链并搅拌，获得所述铂金二氧化硅纳米微球信号标签。 8.如权利要求7所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于：在所述步骤10中，所述的将四氯金酸和柠檬酸三钠用去离子水定容后所得的溶液中，四氯金酸的浓度为2.5ⅹ10-2mmol/L，柠檬酸三钠的浓度为73.5mg/L；所述的加入硼氢化钠溶液与所述的将四氯金酸和柠檬酸三钠用水定容后所得的溶液与硼氢化钠溶液的体积比为3：100，并且该溶液中硼氢化钠的浓度为3ⅹ10-3mol/L，所述的搅拌时间为10～15min；所述的金纳米粒子溶液的浓度为4～4.9mg/L；在所述步骤11中，所述的将三乙胺加入水，所得的三乙胺水溶液浓度为2.7～2.76g/L，所述的加入十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸与三乙胺的质量比为8：1～4：1.4～1.5，正硅酸乙酯、盐酸甲醇溶液、乙醇与三乙胺水溶液的体积比为4：25：4：25；所述的以上配置而成的部分溶液与3-氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为120：1，所述的在室温下搅拌的时间为5～6h；其中，所述的将三乙胺加入水搅拌为磁力搅拌，温度为80℃，时间至少为0.5h；所述的加入十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸，正硅酸乙酯反应温度为80℃，时间至少为1h；所述的盐酸甲醇溶液中盐酸：甲醇体积比为1：9～11，所述的加入盐酸甲醇溶液的反应温度为60～80℃；所述的氨基化二氧化硅纳米微球溶液的浓度为86～100mg/L；在所述步骤12中，氨基化二氧化硅纳米微球与所述金纳米粒子溶液体积比小于1：5；所述超声搅拌反应时间至少为10min；在所述步骤13中，所述的红色的金二氧化硅纳米微球溶液的浓度为19.4mg/L，所述的在所述红色的金二氧化硅纳米微球溶液溶液中加入氯铂酸后所得到的溶液中，氯铂酸的浓度为0.47mol/L，所述的加入硼氢化钠溶液后所得的溶液中，硼氢化钠的浓度为4.8ⅹ10-5mol/L，所述铂金二氧化硅纳米微球溶液的浓度为18.2～31.2mg/L；所述的加入氯铂酸搅拌的时间至少为10min；在所述步骤14中，戊二醛原液和所述铂金二氧化硅纳米微球溶液体积比为1：5；所述的取戊二醛原液加入到所述铂金二氧化硅纳米微球溶液中并在室温下孵育时间至少为30min；所述的戊二醛修饰过的铂金二氧化硅纳米微球溶液再加入氨基化修饰的适配体DNA互补链后所得到的溶液中，所述氨基化修饰的适配体DNA互补链的浓度为0.46～0.60nmol/mL；所述的加入氨基化修饰的适配体DNA互补链并在室温下搅拌反应时间至少为30min；所述铂金二氧化硅纳米微球信号标签的浓度为0.19～0.30mg/L。 9.如权利要求6所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于，制备所述四氧化三铁纳米微球捕获剂具体包括：步骤20、取戊二醛原液加入到四氧化三铁纳米微球溶液中并在室温下孵育；反应所得的戊二醛修饰过的四氧化三铁纳米微球溶液离心洗涤，分散到水中；加入氨基化修饰的适配体DNA链并在室温下搅拌反应，得到的溶液用磁场洗涤获得所述四氧化三铁纳米微球捕获剂。 10.如权利要求9所述的一种检测黄曲霉毒素B1的检测方法，其特征在于：在所述步骤20中，所述的四氧化三铁纳米微球溶液浓度为10-9mol/L；所述的取戊二醛原液加入到四氧化三铁纳米微球溶液中并在室温下孵育时间至少为30min；戊二醛原液与四氧化三铁纳米微球溶液的体积比为1：5；所述的加入氨基化修饰的适配体DNA链并在室温下搅拌反应时间至少为30min；所述的反应所得的戊二醛修饰过的四氧化三铁纳米微球溶液离心洗涤，分散到水中；加入氨基化修饰的适配体DNA链后所得到的溶液中，所述氨基化修饰的适配体DNA链的浓度为2.45nmol/ml；所述四氧化三铁纳米微球捕获剂的浓度为1～1.6ⅹ10-9mol/L。
所属类别：	发明专利