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原文传递一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法

专利名称：	一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法
摘要：	本发明公开了一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法，通过优化磁珠活化体系，与常用的EDC/NHS体系活化操作相比，更加简单高效。通过使用两种不同捕获性能的抗体以特定的比例混合，显著降低了免疫磁珠的漏检率。通过将制得的免疫磁珠保存在特定组成的保存液中，使免疫磁珠可以在4～8℃保存条件下一年内维持较高的活性，确保了免疫磁珠在保存与使用过程中性能的稳定，为免疫磁珠在实际检测中的应用提供了保障。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东环凯微生物科技有限公司
发明人：	曲晓莹;蔡芷荷;卢勉飞;万强;徐环;吴清平;李艳嫦
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201811648712.9
公开号：	CN109709319A
代理机构：	广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：	许飞
分类号：	G01N33/531(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510663 广东省广州市萝岗区广州开发区科学城神舟路788号
主权项：	1.一种沙门氏菌免疫磁珠的制备方法，包括如下步骤： 1)将羧基磁珠清洗干净，分散于超纯水中； 2)在分散有羧基磁珠的超纯水中加入MIX&GO活化剂，混合均匀，活化磁珠； 3)使用MEST缓冲液洗涤活化后的磁珠后，将清洗后活化磁珠分散于MES缓冲液中； 4)向MES缓冲液中加入两种抗沙门氏菌抗体，使其反应偶联在磁珠上； 5)将偶联后的磁珠用TBST缓冲液洗涤，加入封闭液进行封闭处理； 6)封闭完成后，使用TBST缓冲液洗涤封闭后的磁珠，得到沙门氏菌免疫磁珠。 2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：其制备方法包括如下步骤： 1)取1mg羧基磁珠放入EP管中，加入1ml超纯水中超声30s，离心去掉上清，清洗干净，最后重悬于100μL超纯水中； 2)缓慢加入MIX&GO活化剂100μL，置于混匀仪上室温活化1h； 3)活化后加入1ml MEST缓冲液洗涤2遍，重悬于100μLMES缓冲液中； 4)缓慢加入抗沙门氏菌抗体，置于混匀仪上室温偶联2h； 5)用TBST缓冲液洗涤磁珠，加入1ml封闭液，置于混匀仪上封闭2h； 6)封闭完成后，用TBST缓冲液洗涤磁珠，得到沙门氏菌免疫磁珠。 3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：MEST缓冲液的盐浓度为25mM，pH6.0。 4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：封闭液的组成为：0.1wt％BSA，0.05wt％Tween-20，0.1M TBS缓冲液，pH8.2。 5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：TBST缓冲液的组成为：0.05wt％Tween-20，0.1M TBS缓冲液，pH8.2。 6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：抗沙门氏菌抗体为KPL单克隆抗体和上海慧耘单克隆抗体。 7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：KPL单克隆抗体的用量为70～80μg，上海慧耘单克隆抗体的用量为30～35μg。 8.根据权利要求1、2或7所述的制备方法，其特征在于：羧基磁珠的粒径为100～800nm，优选为300nm。 9.根据权利要求1、2或7所述的制备方法，其特征在于：将沙门氏菌免疫磁珠分散于免疫磁珠保存液中保存，免疫磁珠保存液的组分包括：3～5wt％BSA、3～4wt％酪蛋白钠、1～3wt％甘油、5～7wt％蔗糖、6～8wt％海藻糖、0.3～0.5wt％PVP、10～15wt％商品化蛋白酶稳定剂，适量防腐剂，缓冲液。 10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：免疫磁珠保存液中的防腐剂为0.1～0.15wt％终浓度的Proclin。
所属类别：	发明专利