详情

原文传递高敏心肌肌钙蛋白I磁微粒化学发光免疫检测试剂盒、制备方法及用途

专利名称：	高敏心肌肌钙蛋白I磁微粒化学发光免疫检测试剂盒、制备方法及用途
摘要：	本申请提供一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs‑cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中该试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，该试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，该磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠。该试剂盒还可包括H2O2溶液和碱溶液。本申请还提供了该试剂盒的制备方法和用途。本申请的试剂盒能对cTnI抗原的多个表位进行识别，大大提高了心肌肌钙蛋白I化学发光免疫检测试剂盒的分析灵敏度和精密度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	深圳上泰生物工程有限公司
发明人：	陈小茹;肖桥斌;吴向东;周博
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-15T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201910115715.4
公开号：	CN109709323A
代理机构：	深圳鼎合诚知识产权代理有限公司
代理人：	张海平;彭家恩
分类号：	G01N33/543(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	518000 广东省深圳市光明新区光明街道观光路3009号光明科技园A1栋9楼
主权项：	1.一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中所述试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体溶于捕获抗体稀释液中；所述试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体的质量比为1:1，溶于标记抗体稀释液中；所述磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠溶于磁珠稀释液中。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体在所述试剂R1中的浓度为0.4-2μg/mL，所述捕获抗体稀释液包含10-150mM Na2HPO4、10-150mMKH2PO4、50-200mM NaCl、50-200mM KCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH 6.50-8.50。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体在所述试剂R2中的浓度为0.1-5μg/mL，所述标记抗体稀释液包含10-150mM 2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH 6.10-8.20。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠在所述磁微粒工作液中的浓度为0.5-1mg/mL，所述磁珠稀释液包含20-100mM Na2HPO4、20-100mM KH2PO4、50-180mM NaCl、50-180mM KCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.05％-0.1％(v/v)ProClin300、0.05％-0.1％(v/v)Tween-20、1％(v/v)PEG、0.05-0.5％(w/v)酪蛋白，pH7.0-8.50。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述cTnI抗原校准品为通过将cTnI抗原加入到含有10-100mM Tris-HCl,10-200mM NaCl,10-200mM KCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH 6.5-8.5的稀释液中制得的浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的一系列cTnI抗原溶液。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包括H2O2溶液和碱溶液，所述H2O2溶液的浓度为0.1％-1％，所述碱溶液的浓度为0.1M-1M。 7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述碱溶液为NaOH溶液或者KOH溶液。 8.一种制备根据权利要求1-7中任一项所述的试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)用生物素标记抗cTnI多克隆抗体，其中抗cTnI多克隆抗体与生物素的质量比为5:1-20:1，经脱盐纯化得到所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体； (2)将制备得到的所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体用所述捕获抗体稀释液配成0.4-2μg/mL的浓度，得到所述试剂R1； (3)用吖啶酯标记两株针对不同cTnI抗原表位的抗cTnI单克隆抗体，其中每株所述抗cTnI单克隆抗体与吖啶酯的质量比为5:1-20:1，经脱盐纯化得到所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体； (4)将制备得到的所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体以质量比1:1混合，然后用所述标记抗体稀释液配成0.1-5μg/mL的浓度，得到所述试剂2； (5)用磁珠稀释液将链霉亲和素磁珠稀释至0.5-1mg/mL的浓度，得到所述磁微粒工作液； (6)将cTnI抗原加入到含有10-100mM Tris-HCl,10-200mM NaCl,10-200mM KCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH 6.5-8.5的稀释液中，制得浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的cTnI抗原校准品； (7)将所述试剂R1、所述试剂R2、所述磁微粒工作液和所述cTnI抗原校准品连同试剂盒说明书装装在试剂盒包装中，制得所述试剂盒。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，还包括提供浓度为0.1％-1％的H2O2溶液和浓度为0.1M-1M的碱溶液，并且将所述H2O2溶液和所述碱溶液装在试剂盒包装中，制得所述试剂盒。 10.根据权利要求1-7中任一项所述的试剂盒用于非治疗性检测心肌肌钙蛋白I含量的用途。
所属类别：	发明专利