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原文传递一种利用荧光检测乳酸脱氢酶活性的纳米生物传感器及其制备方法、应用

专利名称：	一种利用荧光检测乳酸脱氢酶活性的纳米生物传感器及其制备方法、应用
摘要：	本发明公开了一种利用荧光检测乳酸脱氢酶活性的纳米生物传感器，其特征在于，其是以水热法合成的具有红光发射的掺杂Mn2+的立方相稀土上转换发光纳米粒子为基础，通过其表面油酸配体与尼罗蓝衍生物(NB‑C18PMH‑PEG)之间的亲疏水相互作用制成的，具有水溶性，结构稳定，化学组成差异小，且传感信号强度较高的杂化纳米生物传感器。本发明还提供了其制备方法及应用。本发明提供的杂化纳米生物传感器稳定性好、生物相容性好，利用其上转换荧光成像信号，可在体外起到辅助癌细胞诊断以及药物筛选的作用，满足临床诊断与抗癌药物研发的需求。本发明提供的制备方法具有制备工艺简洁、高效、质量稳定的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海大学
发明人：	孙丽宁;王卓;姜宏;施利毅;张强
专利状态：	有效
申请日期：	2018-11-12T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-03T00:00:00+0800
申请号：	CN201811343656.8
公开号：	CN109709081A
代理机构：	广州高炬知识产权代理有限公司
代理人：	孙明科
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	200444 上海市宝山区上大路99号
主权项：	1.一种利用荧光检测乳酸脱氢酶活性的纳米生物传感器，其特征在于，其是以水热法合成的具有红光发射的掺杂Mn2+的立方相稀土上转换发光纳米粒子为基础，通过其表面油酸配体与尼罗蓝衍生物之间的亲疏水相互作用制成的，具有水溶性，结构稳定，化学组成差异小，且传感信号强度较高的杂化纳米生物传感器；其中尼罗蓝衍生物的表达式为NB-C18PMH-PEG。 2.权利要求1所述利用荧光检测乳酸脱氢酶活性的纳米生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)制成纳米粒子：合成表面配体为油酸的油溶性掺杂Mn2+稀土上转换发光纳米粒子，其环己烷分散液与无水乙醇混合，超声分散后离心，取固体分散到三氯甲烷中，使稀土上转换发光纳米粒子的表面被油酸配体配位，得到第一分散液； 2)制得配体的前驱物：将聚马来酸酐/1-十八碳烯交替共聚物(C18PMH)和甲氧基聚乙二醇胺(mPEG-NH2)溶于二氯甲烷中，加入三乙基胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)后，室温下搅拌，得到第二分散液； 3)制得改性配体：将第二分散液旋转蒸发得到粉红色固体粉末，溶于N,N-二甲基甲酰胺中，加入尼罗蓝(Nile Blue A,NB)、EDC和N-羟基硫代琥珀酰亚胺后，室温下避光搅拌，通过透析袋用去离子水透析，冷冻干燥后，分散到三氯甲烷中，得到第三分散液，制得尼罗蓝衍生物，其表达式为：NB-C18PMH-PEG； 4)整体表面改性：将第一分散液与第三分散液混合，40～60℃加热条件下避光搅拌，蒸发三氯甲烷后，分散到去离子水中，即得到杂化纳米生物传感器。 3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述第一分散液具体步骤为：合成表面配体为油酸的油溶性掺杂Mn2+稀土上转换发光纳米粒子，将其分散在环己烷中，预备一定体积的无水乙醇，然后以体积比1:1～1:2的比例混合，并在室温下超声分散后，每分钟8000～10000转，离心洗涤，将所得固体分散到三氯甲烷中得到第一分散液。 4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述第二分散液具体步骤为：先将聚马来酸酐/1-十八碳烯交替共聚物、甲氧基聚乙二醇胺和EDC超声溶于二氯甲烷中，然后注入三乙基胺，混合均匀，室温下搅拌24小时，得到第二分散液。 5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中所述第三分散液具体步骤为：先将第二分散液旋转蒸发得到粉红色固体粉末，溶于N,N-二甲基甲酰胺中，得到C18PMH-PEG的N,N-二甲基甲酰胺溶液，然后将尼罗蓝、EDC和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶解到N,N-二甲基甲酰胺中，其后与C18PMH-PEG的N,N-二甲基甲酰胺溶液混合均匀，室温下避光搅拌24小时。通过截留分子量为12000～14000的透析袋使用去离子水透析48小时，离心洗涤三次后，冷冻干燥，将得到的固体分散到三氯甲烷中，得到第三分散液。 6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中的具体步骤为：向第一分散液中加入第三分散液，充分搅拌混合，40～60℃加热条件下避光搅拌，将三氯甲烷完全蒸发后，加入去离子水，离心洗涤三次，最终分散在去离子水中，得到杂化纳米生物传感器。 7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)所述第一分散液中，表面配体为油酸的油溶性掺杂Mn2+的稀土上转换发光纳米粒子包括：NaYbF4:Mn/Er、NaYbF4:Mn/Er/Tm、NaYF4:Yb/Mn/Er、NaYF4:Yb/Mn/Er/Tm。 8.根据权利要求1所述利用荧光检测乳酸脱氢酶活性的纳米生物传感器的应用，其特征在于，该杂化纳米生物传感器应用于乳酸脱氢酶活性标志物酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)浓度的检测，在临床诊断中进行体外辅助癌细胞诊断。 9.根据权利要求1所述利用荧光检测乳酸脱氢酶活性的纳米生物传感器的应用，其特征在于，该杂化纳米生物传感器应用于抑制乳酸脱氢酶活性的抗癌药物治疗效果的检测，进行抗癌药物筛选。
所属类别：	发明专利