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原文传递鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法及其染色液和制备方法

专利名称：	鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法及其染色液和制备方法
摘要：	本发明公开了一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其为含异硫氰酸的磷酸盐缓冲液。据此，发明人还建立了该染色液的制备方法，以及使用该染色液的检测方法，该检测方法采用前述染色液对样品进行荧光染色，然后在荧光显微镜下观察孢子。应用本发明对鳞翅目昆虫微粒子原虫的孢子壳进行荧光染色，制片简单容易操作；采用用荧光显微镜和鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液染色，使昆虫微粒子原虫孢子具荧光特异性；对照标准物的形状特征，可确保检验具重复性和准确性。总之，本发明具有操作简便、特异性强、识别容易的特点，为机械检验和公正检验奠定了基础，具有较高的实用价值和广阔的市场前景。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	广西壮族自治区蚕业技术推广总站
发明人：	朱方容;黄深惠;黄旭华;李韬;王霞;蒋满贵;李标
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811630016.5
公开号：	CN109724956A
代理机构：	广西南宁公平知识产权代理有限公司
代理人：	杨立华
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	530007 广西壮族自治区南宁市西乡塘区下均路10号
主权项：	1.一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其特征在于为含异硫氰酸的磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液的pH值为7.8-9.0。 2.根据权利要求1所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液，其特征在于：所述异硫氰酸的浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL。 3.权利要求1所述鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液的制备方法，其特征在于：用pH值为7.8-9.0的磷酸盐缓冲液溶解异硫氰酸粉至浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL，然后用滤网过滤。 4.根据权利要求1所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子染色液的制备方法，其特征在于：所述滤网的网眼为35-45μm。 5.一种鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于使用权利要求1所述染色液对样品进行荧光染色，然后在荧光显微镜下观察孢子。 6.根据权利要求5所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于包括以下步骤：染色液的制备、样本制备、染色和观察。 7.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于所述染色液的制备按以下操作进行：以异硫氰酸粉为荧光染色剂，用pH值为7.8-9.0的磷酸盐缓冲液溶解异硫氰酸粉至浓度为0.1mg/mL-0.5mg/mL，然后用滤网过滤。 8.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于所述样本制备按以下操作进行：用KOH或NaOH溶液研磨或稀释待检物，用滤网过滤，滤液作为待检液备用。 9.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于所述染色和观察按以下操作进行：染色液和待检液在离心管中混合，放置于黑暗处，室温下孵育约15-30分钟，3000转/min离心5-10min,弃掉上清液，摇匀；经过染色的待检液，滴在玻片制片，对照微粒子原虫孢子标准品用荧光显微镜观察检验。 10.根据权利要求6所述的鳞翅目昆虫微粒子原虫孢子的检测方法，其特征在于：所述KOH或NaOH溶液的质量浓度为0.5％-1％，滤网的网眼为35-45μm，待检液与染色液的比例为4︰1至20︰1。
所属类别：	发明专利