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原文传递一种降钙素原（PCT）检测试剂盒

专利名称：	一种降钙素原（PCT）检测试剂盒
摘要：	本发明涉及降钙素原（PCT）检测技术领域，特别涉及一种降钙素原（PCT）检测试剂盒及其制备、使用方法，试剂R1中含有缓冲液，氯化钾，乌来糖，2‑羟丙基‑β‑环糊精，山梨糖醇，PEG‑20000，N，N‑二乙基‑对十八烷基苯磺酰胺丙基铵基丙磺酸盐，防腐剂；试剂R2中含有缓冲液，乌来糖，2‑羟丙基‑β‑环糊精，山梨糖醇，兔抗人降钙素原（PCT）抗体包被胶乳颗粒（65nm），兔抗人降钙素原（PCT）抗体包被胶乳颗粒（145nm），兔抗人降钙素原（PCT）抗体包被胶乳颗粒（280nm），N，N‑二乙基‑对十八烷基苯磺酰胺丙基铵基丙磺酸盐，防腐剂；本发明显著改善了试剂的稳定性和线性范围，显著增强了试剂的灵敏度和准确度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东博科生物产业有限公司
发明人：	甘宜梧;李志明;王美丽
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-30T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811653771.5
公开号：	CN109725160A
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250200 山东省济南市章丘区明水经济开发区(经十东路与明埠路交界山东博科产业园)
主权项：	1.一种降钙素原(PCT)检测试剂盒，其特征在于：其包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括如下含量的组分：所述试剂R2包括如下含量的组分： 2.根据权利要求1所述的降钙素原(PCT)检测试剂盒，其特征在于：试剂R1中缓冲液为25℃，pH为7.85的4-(N-吗啉基)丁磺酸(MOBS)缓冲液；试剂R2中缓冲液为25℃，pH为8.25的4-(N-吗啉基)丁磺酸(MOBS)缓冲液。 3.根据权利要求1所述的降钙素原(PCT)检测试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为苯氧乙醇(PE-99)。 4.根据权利要求1所述的降钙素原(PCT)检测试剂盒的制备方法，其特征在于：兔抗人降钙素原(PCT)抗体包被胶乳颗粒的制备方法为(65nm、145nm和280nm三种粒径的微球包被降钙素原抗体均按以下工序进行)： 1)羧基胶乳颗粒(65nm/145nm/280nm)缓冲体系更换：取适量胶乳颗粒，加适量BIS-TRIS-HCL缓冲液(pH5.0-5.5)，振荡混匀，然后离心(粒径为280nm的胶乳微球，12000rpm离心30min；粒径为145nm的胶乳微球15000rpm离心45min；粒径为65nm的胶乳微球20000rpm离心60min)，弃上清。加入少量BIS-TRIS-HCL缓冲液超声重悬，待用(一般1mg微粒加入BIS-TRIS-HCL缓冲液100μL)； 2)活化：每1mg胶乳颗粒加入0.1-0.5mg EDC和0.1mg NHS。以1mg胶乳颗粒为例，补充BIS-TRIS-HCL定容到200-500μL体积，40℃振荡反应(转速80-100rpm)半小时； 3)清洗：活化结束后，加适量BIS-TRIS-HCL，离心(14000rpm 30min)，去上清，加入200μL BIS-TRIS-HCL超声重悬，重复一次，加入HEPES pH8.0超声重悬，补满HEPES离心，加HEPES重悬后待用； 4)偶联：加入适量降钙素原(PCT)抗体，定容至250-400μL，混匀，于恒温振荡箱37℃反应4.5小时(转速120-150rpm)； 5)封闭：加入100μL 100mg/mL BSA，2-8℃封闭12小时； 6)清洗：离心(粒径为280nm的胶乳微球，12000rpm离心30min；粒径为145nm的胶乳微球15000rpm离心45min；粒径为65nm的胶乳微球20000rpm离心60min)，弃上清。然后加入适量PBS缓冲液，重悬，超声2分钟后，再次离心(粒径为280nm的胶乳微球，12000rpm离心30min；粒径为145nm的胶乳微球15000rpm离心45min；粒径为65nm的胶乳微球20000rpm离心60min)，去除上清，所得沉淀即为兔抗人降钙素原(PCT)抗体包被胶乳颗粒。 5.根据权利要求1-4任意一项所述的降钙素原(PCT)检测试剂盒的使用方法，其特征在于：使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为600nm，R1试剂和R2试剂的比例为3:1。
所属类别：	发明专利