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原文传递一种血清多肽组学的质谱检测方法

专利名称：	一种血清多肽组学的质谱检测方法
摘要：	本发明提供了一种血清多肽组学的质谱检测方法，包括样本制备、数据非依赖性质谱采集及数据处理；该方法针对血清多肽组学样本发展了数据非依赖性质谱采集方法，通过对血清样本的预分析实验获取样本的母离子分布情况，由此确定最优的可变隔离窗口；通过对多肽组学样品制备方法、质谱采集方法和数据处理方法的优化，各步骤各条件相互配合，最终实现多肽检测数目、鉴定重现性和定量准确性的显著提高；本发明方法具有高通量、高重现性和高准确性的特点，适合于大规模临床血清样本的分析及疾病标志物的检测，具有广泛的应用前景和巨大的市场价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	南方科技大学
发明人：	林琳
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-07T00:00:00+0800
申请号：	CN201811642365.9
公开号：	CN109725078A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	巩克栋
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	518000 广东省深圳市南山区西丽学苑大道1088号
主权项：	1.一种血清多肽组学的质谱检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤： (1)制备血清多肽组学样品； (2)将步骤(1)的样品进行数据非依赖性质谱采集； (3)构建谱图库，将步骤(2)的数据进行分析和处理；其中，步骤(2)所述数据非依赖性质谱采集的循环扫描模式包含一个一级全扫描和30个可变窗口的数据非依赖性二级扫描，所述30个可变窗口如下：m/z 350-415，m/z 415-449，m/z 449-475，m/z 475-493，m/z 493-512，m/z 512-530，m/z 530-547，m/z 547-561，m/z 561-573，m/z 573-588，m/z 588-606，m/z 606-622，m/z 622-634，m/z 634-649，m/z649-663，m/z 663-679，m/z 679-693，m/z 693-706，m/z 706-723，m/z 723-742，m/z 742-761，m/z 761-780，m/z 780-799，m/z 799-823，m/z 823-853，m/z 853-889，m/z 889-920，m/z 920-974，m/z 974-1064，m/z 1064-1537。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述数据非依赖性质谱采集的检测系统为：纳流液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述纳流液相色谱的色谱柱为自制纳流C18色谱柱，上样量为1-5μL，流速为200-300nL/min；优选地，所述纳流液相色谱的A流动相为0.1％甲酸水溶液，B流动相为0.1％甲酸-乙腈溶液；优选地，所述纳流液相色谱的分析梯度为：0-2min，3％-7％B流动相；2-52min，7％-22％B流动相；52-62min，22％-35％B流动相；62-64min，35％-90％B流动相；64-80min，90％B流动相。 4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述静电场轨道阱高分辨质谱系统的离子源为纳喷雾离子源，扫描模式为正离子，喷雾电压为1.8-2.2KV，离子传输管温度为300-350℃；优选地，所述静电场轨道阱高分辨质谱系统的质谱条件包括：一级全扫描的扫描范围为m/z 350-1550，一级全扫描的分辨率为70000，碎裂模式为高能碰撞解离HCD，碎裂能量为27％，二级扫描的分辨率为17500，最大离子注入时间为自动。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述构建谱图库的方法为：采用DDA方法对混合样品进行重复采集，将采集的数据进行搜库，构建谱图库。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述混合样本由待分析的血清样品进行等量混合得到；优选地，所述重复采集的次数为2-5次；优选地，所述搜库的软件为Proteme Discoverer软件；优选地，所述构建的软件为Spectrounaut软件。 7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述搜库的参数包括：母离子质量精度为10ppm，子离子质量精度为0.02Da；优选地，所述搜库的参数还包括：酶切方式为非特异性酶切，可变修饰包括甲硫氨酸氧化、天冬酰胺和谷氨酰胺去酰胺化、N-端乙酰化和谷氨酰胺的焦谷氨酸化，固定修饰为无；优选地，所述分析和处理的方法为：使用q<0.01对鉴定结果进行卡值，通过将MS2碎片离子的峰面积相加来计算多肽强度。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述制备的方法包括先加入含乙腈的碳酸氢铵溶液稀释样品并漩涡震荡；优选地，所述乙腈的体积百分数为15-25％；优选地，所述碳酸氢铵的浓度为20-50mM。 9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤： (1)制备血清多肽组学样品，先加入含体积百分数为15-25％的乙腈的20-50mM的碳酸氢铵溶液稀释样品并漩涡震荡； (2)将步骤(1)的样品进行数据非依赖性质谱采集；数据非依赖性质谱采集的检测系统为：纳流液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统；纳流液相色谱的色谱柱为自制纳流C18色谱柱，上样量为1-5μL，流速为200-300nL/min；纳流液相色谱的A流动相为0.1％甲酸水溶液，B流动相为0.1％甲酸-乙腈溶液；纳流液相色谱的分析梯度为：0-2min，3％-7％B流动相；2-52min，7％-22％B流动相；52-62min，22％-35％B流动相；62-64min，35％-90％B流动相；64-80min，90％B流动相；静电场轨道阱高分辨质谱系统的离子源为纳喷雾离子源；扫描模式为正离子；喷雾电压为1.8-2.2KV；离子传输管温度为300-350℃；静电场轨道阱高分辨质谱系统的质谱条件包括：一级全扫描的扫描范围为m/z 350-1550，一级全扫描的分辨率为70000，碎裂模式为高能碰撞解离HCD，碎裂能量为27％，二级扫描的分辨率为17500，最大离子注入时间为自动；其中，步骤(2)所述数据非依赖性质谱采集的循环扫描模式包含一个一级全扫描和30个可变窗口的数据非依赖性二级扫描，所述30个可变窗口如下：m/z 350-415，m/z 415-449，m/z 449-475，m/z 475-493，m/z 493-512，m/z 512-530，m/z 530-547，m/z 547-561，m/z 561-573，m/z 573-588，m/z 588-606，m/z 606-622，m/z 622-634，m/z 634-649，m/z649-663，m/z 663-679，m/z 679-693，m/z 693-706，m/z 706-723，m/z 723-742，m/z 742-761，m/z 761-780，m/z 780-799，m/z 799-823，m/z 823-853，m/z 853-889，m/z 889-920，m/z 920-974，m/z 974-1064，m/z 1064-1537； (3)采用DDA方法对将待分析的血清样品进行等量混合得到的混合样品进行2-5次重复采集，将采集的数据进行搜库，构建谱图库，搜库的软件为Proteme Discoverer软件，构建的软件为Spectrounaut软件，所述搜库的参数包括：母离子质量精度为10ppm，子离子质量精度为0.02Da，酶切方式为非特异性酶切，可变修饰包括甲硫氨酸氧化、天冬酰胺和谷氨酰胺去酰胺化、N-端乙酰化和谷氨酰胺的焦谷氨酸化，固定修饰为无；将步骤(2)的数据进行分析和处理，使用q<0.01对鉴定结果进行卡值，通过将MS2碎片离子的峰面积相加来计算多肽强度。
所属类别：	发明专利