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原文传递一种观察花芽分化过程的石蜡切片的制作方法

专利名称：	一种观察花芽分化过程的石蜡切片的制作方法
摘要：	本发明涉及一种观察花芽分化过程的石蜡切片制作方法，包括植物样本取材固定、脱水透明、透蜡包埋、蜡块修正切片、粘片展片、染色封固；所述植物样本取材固定包括切取植物茎尖中心组织，所述切取植物茎尖中心组织包括以茎尖中心点及叶片的基生线为轴，在平行于叶片基生线方向切取宽度为4‑6mm，在垂直于叶片基生线方向切取宽度为2‑4mm，在高度方向切取5‑7mm。本发明采用特殊的取材方法，可以真实准确的反映出植物茎尖的生长状态，为观察植物花芽分化过程提供了细胞学视角；较传统的石蜡切片固定方法，本发明的固定方法减少了幼嫩材料固定后变脆的情况。本发明的方法保证了观察测量茎尖生长点角度的准确性，比传统石蜡切片更高效，得到的切片准确性更高。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山西;14
申请人：	山西省农业科学院园艺研究所
发明人：	李志娟;付宝春;王云山;李素清
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-25T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201811595700.4
公开号：	CN109738249A
分类号：	G01N1/28(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	030031 山西省太原市小店区许坦东街21号
主权项：	1.一种观察花芽分化过程的石蜡切片制作方法，其特征在于，包括植物样本取材固定、脱水透明、透蜡包埋、蜡块修正切片、粘片展片、染色封固；其中，所述植物样本取材固定包括切取植物茎尖中心组织，所述切取植物茎尖中心组织包括以茎尖中心点及叶片的基生线为轴，在平行于叶片基生线方向切取宽度为4-6mm，在垂直于叶片基生线方向切取宽度为2-4mm，在高度方向切取5-7mm。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物样本取材固定包括：剖离基生在植物根状茎上的叶片后，切取植物茎尖中心组织，浸于装有FPA固定液的容器中，并将所述容器置于真空干燥器内，使样品沉底，得到固定样本。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述脱水透明包括：将所述固定样本中的液体倒出后，向其中置换不同梯度的脱水机和透明剂进行脱水透明。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述透蜡包埋包括：将脱水透明后得到的材料进行预处理后，进行包埋，所述预处理包括将所述脱水透明后得到的材料依次放入体积比为1:6的石蜡和叔丁醇混合液、体积比为3:8的石蜡和叔丁醇混合液、熔化的纯石蜡A、熔化的纯石蜡B、熔化的纯石蜡C。 5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述置换不同梯度的脱水机和透明剂进行脱水透明包括：50％乙醇浸泡处理、60％乙醇浸泡处理、70％乙醇浸泡处理、体积比为13:7的75％乙醇和叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为9:11的85％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为1:3的95％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理、纯叔丁醇A浸泡处理、纯叔丁醇B浸泡处理。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述50％乙醇浸泡处理、60％乙醇浸泡处理、70％乙醇浸泡处理、体积比为13:7的75％乙醇和叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为9:11的85％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理、体积比为1:3的95％乙醇叔丁醇混合液浸泡处理的处理时间均为20分钟；所述纯叔丁醇A浸泡处理、纯叔丁醇B浸泡处理的处理时间均为1小时。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述置换不同梯度的脱水机和透明剂进行脱水透明在摇床中进行，摇床温度为25℃，转速为100r/h。 8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述粘片展片包括：将蜡片用明胶粘贴剂粘在载玻片上，置于展片台上加热至完全伸展，展片台温度设定为42℃。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述染色封固包括：依次采用二甲苯、体积比为1:2的无水乙醇和二甲苯混合液、体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液、无水乙醇、95％乙醇、90％乙醇、80％乙醇、70％乙醇、60％乙醇分别浸泡；采用1％苯胺番红染液暗环境染色3-5小时后，依次采用60％乙醇、70％乙醇、80％乙醇、90％乙醇、95％乙醇浸泡20-30秒；采用0.5％苯胺固绿染液染色后，依次采用95％乙醇、无水乙醇、体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液、纯二甲苯进行浸泡处理；采用二甲苯稀释的加拿大树胶作为封固剂，盖上盖玻片封固。 10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述1％苯胺番红染液的溶剂为50％乙醇溶液；所述0.5％苯胺固绿染液的溶剂为95％乙醇溶液，染色时间为30秒；采用0.5％苯胺固绿染液染色后，所述95％乙醇的处理时间为3-5秒，所述无水乙醇、体积比为1:1的无水乙醇和二甲苯混合液的处理时间均为20-30秒，所述纯二甲苯的处理时间为2分钟。
所属类别：	发明专利