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原文传递一种柱花草染色体的制片方法

专利名称：	一种柱花草染色体的制片方法
摘要：	本发明公开了一种柱花草染色体的制片方法，步骤为：选取饱满的柱花草种子去种皮，浸泡培养，待根尖长至1～1.5cm时，在上午8:00～9:00这一时间段采集柱花草根尖样品；根尖浸泡进行预处理；投入到固定液中固定；解离，去掉盐酸并水洗，用固定液固定，进行涂片；取根尖置于干净载玻片上，加1～2滴新配固定液，用镊子夹碎根尖，然后在酒精灯火焰上烤干；将玻片倒扣在垫有枕木的白瓷板上，将磷酸缓冲液与Giemsa原液按20：1混合，染色，冲洗，晾干制得。可以批量制得形态较清晰的染色体制片，染色体的离散程度较大，能更清晰观测细胞内染色体的长度、着丝粒位置、臂比、随体大小等特征，通过核型分析确定染色体倍性，可对倍性育种、人工诱导等提供关键技术。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	海南;46
申请人：	中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所
发明人：	严琳玲;苏庆祥;张瑜;刘一明
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910102559.8
公开号：	CN109738260A
代理机构：	北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	赵蕊红
分类号：	G01N1/30(2006.01);G;G01;G01N;G01N1
申请人地址：	571737 海南省儋州市宝岛新村
主权项：	1.一种柱花草染色体的制片方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)选取饱满的柱花草种子去种皮，用70～80℃的水浸泡3～5min，然后置于25～28℃的人工气候箱中发芽培养，待根尖长至1～1.5cm时，在上午8:00～9:00这一时间段采集柱花草根尖样品； 2)将取下的根尖置于0.001～0.002mol/L的8-羟基喹啉溶液分别浸泡4.5h～5.5h进行预处理； 3)经过预处理的根尖，用蒸馏水水洗10～15min，然后投入到固定液中固定4～5h，其中，固定液的温度为2～4℃，固定液由比例为3：1甲醇和冰醋酸组成； 4)从固定液中取出根尖，用蒸馏水漂洗30～40min，后用50％的酒精浸泡5～8min，再水洗30～40min，用1mol/L的盐酸于55～60℃恒温分别解离8min～10min，去掉盐酸并水洗30～40min，用固定液固定30～40min，进行涂片； 5)取根尖置于干净载玻片上，切取根尖白色不透明部分，加1～2滴新配固定液，迅速用镊子夹碎根尖，并敲打成匀浆状，然后在酒精灯火焰上烤干，呈现雨点状斑点即可贴上标签； 6)将玻片倒扣在垫有枕木的白瓷板上，将磷酸缓冲液与Giemsa原液按20：1混合，从玻片的下面滴在白瓷板上，染色10～15min，再用蒸馏水冲洗玻片的背面，晾干。 2.根据权利要求1所述的柱花草染色体的制片方法，其特征在于，在步骤1)中，采集柱花草根尖样品的时间为上午9:00。 3.根据权利要求1所述的柱花草染色体的制片方法，其特征在于，在步骤2)中，预处理的时间为5h。 4.根据权利要求1所述的柱花草染色体的制片方法，其特征在于，在步骤4)中，解离时间为9min。
所属类别：	发明专利