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原文传递一种基于新型SERS探针的拉曼免疫检测方法

专利名称：	一种基于新型SERS探针的拉曼免疫检测方法
摘要：	本发明涉及免疫学检测领域，具体而言，涉及一种基于新型SERS探针的拉曼免疫检测方法。一种SERS探针，为中的硫与金纳米颗粒偶联的物质。本发明提供SERS免疫检测新技术，引入了新型的SERS检测探针Au‑DTNB‑Tyr NPs，再结合金标银染技术，在SERS检测探针周围引入银颗粒，起到增强SERS信号的作用。通过上述SERS检测探针和金标银染技术的引入，可高灵敏定量检测待检测物，其检测限为10pg/mL。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
发明人：	肖瑞;贾小飞;荣振;王柯莉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910020330.X
公开号：	CN109738629A
代理机构：	北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	严诚
分类号：	G01N33/532(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100000 北京市海淀区太平路27号院东门
主权项：	1.一种SERS探针，其特征在于，为中的硫与金纳米颗粒偶联的物质；进一步地，所述金纳米颗粒的粒径为28-35nm。 2.权利要求1所述的SERS探针的制备方法，其特征在于，DTNB-Tyr的乙醇溶液与金纳米颗粒混合反应，分离即得。 3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述金纳米颗粒通过柠檬酸钠还原氯金酸的方法制备；进一步地，DTNB-Tyr由DTNB和Tyr通过酰胺反应而合成。 4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述分离采用6000-8000rpm，离心5-10min；进一步地，分离后还包括洗涤的步骤；进一步地，所述洗涤采用BBS进行；进一步地，洗涤后的SERS探针保存在BBS中，备用；进一步地，BBS的浓度均为1.5-3mM。 5.一种SERS检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的探针、与待检测物配对的第一抗体和第二抗体；所述第二抗体标记HRP；所述试剂盒以“支持物-第一抗体-待检测物-第二抗体-标记物”形式完成检测；所述标记物以HRP-权利要求1所述的探针-银颗粒的形式存在。 6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括支持物、银染试剂、PBST、双蒸水中的任一种或多种；进一步地，所述支持物上固定有所述第一抗体；进一步地，所述支持物为硅片基底，优选为醛基化单晶硅片；进一步地，所述待检测物为人IgM，所述第一抗体为动物源抗人IgM，所述第二抗体为动物源抗人IgM-HRP；进一步地，所述第一抗体为羊抗人IgM，所述第二抗体为羊抗人IgM-HRP；进一步地，所述支持物为醛基化硅片基底。 7.SERS免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (a)第一抗体固定在支持物上，晾干； (b)加入待检测物，反应，洗涤，晾干； (c)加入第二抗体，反应，洗涤，晾干； (d)加入权利要求1所述的探针，反应，洗涤，晾干； (e)加入银染试剂，反应，洗涤并晾干； (f)拉曼信号采集；其中，所述第一抗体与所述第二抗体与待检测物配对，所述第二抗体标记HRP。 8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述待检测物为人IgM，所述第一抗体为动物源抗人IgM，所述第二抗体为动物源抗人IgM-HRP，所述支持物为醛基化硅片基底，优选为醛基化单晶硅片；进一步地，所述第一抗体为羊抗人IgM，所述第二抗体为羊抗人IgM-HRP；进一步地，羊抗人IgM-HRP的工作浓度为1:1000。 9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，步骤(a)-(e)中，所述洗涤均采用1×PBST洗涤；进一步地，步骤(a)-(e)中，所述洗涤均洗涤2-3次；进一步地，步骤(a)-(d)中，所述反应均为37±2℃反应25-40min。 10.根据权利要求7-9任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(f)中，信号采集的功率10毫瓦，信号采集时间5秒，选取反应区的4-7个点进行信号采集，并在1337cm-1波段时读取峰值。
所属类别：	发明专利