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原文传递一种新型拉曼探针及其制备方法

专利名称：	一种新型拉曼探针及其制备方法
摘要：	本发明属于拉曼探针制备及应用技术领域，公开了一种新型拉曼探针及其制备方法，合成DNA三棱锥后利用静电作用与季铵盐修饰的纳米金结合；带有巯基的拉曼探针5,5'‑二硫代双与其中的纳米金结合后，得到了一种新型拉曼探针；利用该探针结合EpCAM适体链可以实现对循环肿瘤细胞CTCs的检测。本发明实现了在大量阴性细胞背景下对人乳腺癌细胞MCF‑7细胞的检测以及在人外周血环境中MCF‑7细胞的检测；解决了现有技术的探针对循环肿瘤细胞CTCs的检测准确率低、探针实用性差；检测目标物的灵敏度不高；无法避免交叉杂交，重复性弱；检测时多需要酶催化进行信号放大，检测时间长且价格昂贵的问题。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	青岛科技大学
发明人：	张晓茹;刘超;葛永浩
专利状态：	有效
申请日期：	2019-07-16T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910640946.7
公开号：	CN110243804A
代理机构：	北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	汤东凤
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	266042 山东省青岛市市北区郑州路53号青岛科技大学化学与分子工程学院
主权项：	1.一种新型拉曼探针的制备方法，其特征在于，所述新型拉曼探针的制备方法包括：合成的DNA三棱锥利用静电作用与季铵盐修饰的纳米金结合；得到组装后纳米金；带有巯基的拉曼探针5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)与组装后纳米金结合，得到新型拉曼探针。 2.如权利要求1所述的新型拉曼探针的制备方法，其特征在于，所述新型拉曼探针的制备方法具体包括：室温下通过混合带正电荷的金纳米颗粒与带负电DNA三棱锥两种溶液，进行DNA与金纳米颗粒的组装；选用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)拉曼分子，取DTNB于DMSO溶液中，配置成10mM的储备液，储存在-20℃下；将5μL DNA三棱锥,25μL DTNB,75μL金胶和20μL TE缓冲溶液混合，室温过夜孵育，离心洗涤以去除未结合的反应物；得到新型拉曼探针。 3.一种如权利要求1所述的新型拉曼探针的制备方法制备的新型拉曼探针。 4.一种如权利要求3所述新型拉曼探针在阴性细胞HEK-293T中检测MCF-7细胞中的应用，其特征在于，在阴性细胞HEK-293T中检测MCF-7细胞中的应用方法包括： MCF-7细胞与HEK-293T细胞全部用含10％FBS的RPMI 1640培养基培养；将整瓶生长到80％的MCF-7或HEK-293T细胞用胰蛋白酶消化后，用1mL的培养液吹打使细胞悬浮并采用血细胞计数板进行细胞计数；将所得的细胞悬浮液于3000rpm下离心5min，PBS洗涤三次后稀释到所需浓度；分别向10μL 1.0×106cells/mL HEK-293T细胞悬浮液中加入10μL不同细胞浓度的MCF-7细胞悬浮液，然后加入10μL 1.0×10-6M EpCAM适体链，10μL将已经制备好的拉曼探针共同孵育1h；离心洗涤后分散于10μL PBS中，移取1μL滴加于活化好的金片上检测拉曼信号。 5.一种如权利要求2所述新型拉曼探针在人外周血中检测MCF-7细胞中的应用，其特征在于，所述在人外周血中检测MCF-7细胞中的应用方法，包括：将500μL含有不同MCF-7细胞数量的PBS缓冲溶液与500μL新鲜的全血混合；滴加于人外周血分离培养基上，400g下离心25min后，从上到下共分为四层，第一层淡黄色液体为血浆层；第二层白膜层为所需分离提取的淋巴细胞及MCF-7细胞层；第三层透明液体为分离介质；第四层为红细胞层；用移液枪移取第二层细胞，加于新的洁净的离心管中，用PBS离心洗涤两次，然后将细胞重新分散于50μL PBS中；使用人外周血分离培养基分离提取所需淋巴细胞及MCF-7细胞层；用PBS离心洗涤两次，再将细胞重新分散于50μL PBS中；将10μL 10-6M EpCAM适体链，10μL拉曼探针添加到细胞悬浮液中，孵育1h；样品在3000rpm下离心5min，PBS洗涤三次，重新分散在10μL PBS中；取1μL滴在金片上，进行拉曼信号的检测。
所属类别：	发明专利