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原文传递一种护肤品中表皮细胞生长因子的快速检测试剂盒及检测方法

专利名称：	一种护肤品中表皮细胞生长因子的快速检测试剂盒及检测方法
摘要：	本发明公开了一种护肤品中表皮细胞生长因子的快速检测试剂盒，包括前处理试剂、EGF胶体金检测试纸条和反应杯；所述前处理试剂为乙腈和复溶液；所述EGF胶体金检测试纸条从上往下依次由吸水纸、硝酸纤维素膜和样品垫组成，统一粘贴在底板上，硝酸纤维素膜上标记有兔抗鼠抗体和EGF偶联抗原，分别用于质控C线和检测T线；所述反应杯中含有胶体金标记的EGF单克隆抗体。本发明试剂盒应用层析式胶体金原理，试纸中检测线与质控线比色来定量检测样品中的EGF，在短时间内快速准确地检测出样品中是否含有EGF，能够满足含EGF标签产品中EGF的确定检测，能满足检测部门、检测机构现场监督执法的需要。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	南方医科大学
发明人：	李婷婷;王奇;黎诚耀
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-17T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910045001.0
公开号：	CN109738637A
代理机构：	广州粤高专利商标代理有限公司
代理人：	陈卫
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	510515 广东省广州市白云区广州大道北1838号
主权项：	1.一种护肤品中表皮细胞生长因子的快速检测试剂盒，其特征在于，包括前处理试剂、EGF胶体金检测试纸条和反应杯；所述前处理试剂为乙腈和复溶液，所述复溶液由以下重量百分数的各组分组成：0.5～2% BSA，3～6% Tris-HCl，0.02～0.06%吐温20，0.02～0.06%S9表面活性剂，余量为纯水；所述EGF胶体金检测试纸条从上往下依次由吸水纸、硝酸纤维素膜和样品垫组成，统一粘贴在底板上，硝酸纤维素膜上标记有兔抗鼠二抗和EGF偶联抗原，分别用于质控C线和检测T线；所述反应杯中含有胶体金标记的EGF单克隆抗体。 2.根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述质控线C线包被的兔抗鼠二抗浓度为0.1～0.3mg/mL。 3.根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述检测线T线包被的EGF偶联抗原浓度为0.3～0.5mg/mL。 4.根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述EGF偶联抗原的制备方法为将活化后的EGF半抗原与牛血清蛋白或卵清蛋白偶联制得EGF偶联抗原。 5.根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述EGF单克隆抗体的制备方法为将EGF偶联抗原免疫小鼠后，取加强免疫的小鼠制备脾细胞，将小鼠脾细胞与生长旺盛的小鼠骨髓瘤细胞融合，经筛选后得到分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞，再将杂交瘤细胞扩大培养，采用小鼠体内诱生腹水法生产得到EGF单克隆抗体。 6.根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述兔抗鼠二抗的制备方法为用偶联抗原免疫新西兰白兔，免疫剂量为50～100μg/次，背部皮下分多点注射；首免，用合成的人工抗原与等量的弗氏完全佐剂乳化；加强免疫，用合成的人工抗原与弗氏不完全佐剂乳化，连续免疫4～5次，每次间隔4～8周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法检测其效价达到105以上时，采血并分离收集血清，以饱和硫酸铵盐析法提取IgG抗体，冻存备用。 7.根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述EGF胶体金检测试纸条的制备方法为先制备硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线，再在在底板上依次粘贴硝酸纤维素膜、样品垫和吸水纸；所述检测线为能与EGF单克隆抗体结合的EGF偶联抗原在硝酸纤维素膜上进行线状点样制得；所述质控线为能与EGF单克隆抗体结合的兔抗鼠抗体在硝酸纤维素膜上进行现状点样制得。 8.根据权利要求1所述的快速检测试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记的EGF单克隆抗体的制备方法为调节胶体金pH值至7～9，然后加入EGF单克隆抗体后立即混匀，25～35min后加入1/10体积的10%BSA，继续搅拌25～35min，离心获得均一的胶体金标记的EGF单克隆抗体沉淀，加入PBS重悬。 9.一种使用权利要求1～8任一项所述试剂盒进行护肤品中表皮细胞生长因子快速检测的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1.样品预处理溶液状样品：取待测样品于容器中，在40～60℃水浴加热以除去有机溶剂，然后加入乙腈稀释，过0.22 µm滤膜，过滤液浓缩，再加入复溶液，振荡混匀后进行检测；膏状、乳状样品：取待测样品于容器中，加入乙腈，振荡混匀后超声提取，离心，取上清液过0.22 µm滤膜，过滤液浓缩，再加入复溶液，振荡混匀后进行检测； S2.标准曲线建立配置EGF标准溶液，将不同浓度的标准加入到反应杯中，混匀，室温孵育；再插入试纸条反应，然后将试纸条置于胶体金分析仪上，读取质控线和检测线对应的OD值，建立OD值与EGF浓度之间的标准曲线； S3.检测吸取步骤S1的样本待测液加入到反应杯中，混匀，室温孵育；再插入试纸条反应，直接观察试纸条颜色变化；或将试纸条置于胶体金分析仪上，读取质控线和检测线对应的OD值，根据OD值计算EGF的浓度结果。 10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品与乙腈的质量体积比为1：1～2g/mL。
所属类别：	发明专利