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原文传递一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法及应用

专利名称：	一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法及应用
摘要：	说明书摘要本发明属于新型纳米复合材料、免疫分析和生物传感技术领域，本发明涉及一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法及应用，基于负载铂钯纳米立方的二硫化钼复合材料构建的无酶电化学免疫传感器，用于定量检测乳腺癌肿瘤标志物含量，具有特异性强，灵敏度高，检测限低的优点，对乳腺癌的早期诊断具有重要的科学意义和应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东理工大学
发明人：	刘青;谭召灵;刘会;董慧;颜芹;董云会
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-19T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910057354.2
公开号：	CN109738641A
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室
主权项：	1.一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法及应用一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）铂钯功能化二硫化钼纳米粒子的制备：将单独制备的PtPd纳米立方和MoS2纳米片结合；（2）构建无标记型铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器，测定乳腺癌肿瘤标志物含量，绘制工作曲线。 2.根据权利要求1所述的一种检测乳腺癌肿瘤标志物的无酶电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的铂钯功能化二硫化钼纳米粒子的制备具体如下： ① PtPd纳米立方的制备在室温下，将0.5 ~ 1.5 mL的20 mmol/L氯钯酸溶液和0.5 ~ 1.5 mL的20 mmol/L氯铂酸溶液加入到含有聚乙烯吡咯烷酮（160 ~ 480 mg）的20 ~ 60 mL乙二醇中，向混合物中加入110 ~ 330 µL的5 mol/L碘化钾水溶液，将混合物在油浴中加热至150 ℃，剧烈搅拌下回流60 min，自然冷却至室温，在转速5000 rpm离心收集得到PtPd纳米立方纳米粒子的水分散系； ② MoS2纳米片的制备将0.25 ~ 0.75 g的Na2MoO4·2H2O溶于25 ~ 75 mL水中，超声处理10 min，当混合物变清透明，向溶液中加入0.5 ~ 1.5 g的L-半胱氨酸和50 ~ 150 mL水，将得到的前体溶液转移到100 ~ 300 mL不锈钢高压釜中，将密封并在200 ℃保持36 h，冷却至室温，在转速10000 rpm下离心15 min收集MoS2纳米片分散液； ③ 铂钯功能化二硫化钼纳米粒子的制备向20.0 mg制备的MoS2纳米片加入5.0 mL ~ 15.0 mL制备的PtPd纳米立方分散液（1.0mg/mL），然后将混合物超声1 h，离心后，黑色沉淀物在室温下干燥，然后，将20.0 mg黑色粉末再分散在5.0 mL缓冲溶液（pH=7.4）中。 3.根据权利要求1所述的一种检测乳腺癌肿瘤标志物的无酶电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的构建无酶电化学免疫传感器，具体如下：（1）将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；（2）将6.0 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的铂钯功能化二硫化钼纳米粒子分散液滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；（3）将6.0 µL、5 ~ 15 µg/mL的乳腺癌肿瘤标志物抗体滴加到电极表面，pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中干燥；（4）继续将3.0 µL、1~ 2 mg/mL的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中晾干；（5）继续滴加6.0 µL、0.1 pg/mL ~ 200 ng/mL的一系列不同浓度的乳腺癌肿瘤标志物抗原溶液，用pH=7.0磷酸盐缓冲液冲洗，4.0 ℃冰箱中干燥，制得一种无酶的无标记型电化学免疫传感器。 4.根据权利要求1所述的一种检测乳腺癌肿瘤标志物的无酶电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的测定乳腺癌肿瘤标志物抗原，绘制工作曲线，具体如下： ① 采用10 mL、50 mmol/L的pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液配制不同浓度的乳腺癌肿瘤标志物抗原溶液，将6 µL不同浓度的乳腺癌肿瘤标志物抗原溶液分别滴涂至电极表面，反应0.5 ~ 2 h，晾干后连接至电化学工作站中，分别将电极浸于pH＝7.0的磷酸盐缓冲溶液中测定其氧化还原电流变化，当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH=7.0磷酸盐缓冲溶液中注入10 µL、5 mol/L的过氧化氢溶液，记录电流变化； ② 根据所得电流差值与乳腺癌肿瘤标志物抗原浓度呈线性关系，绘制工作曲线； ③ 利用工作曲线法，得到待测样品中乳腺癌肿瘤标志物抗原的浓度。 5.如权利要求1所述的一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法制备的传感器，用于乳腺癌肿瘤标志物抗原的测定，其特征在于，所述肿瘤标志物选自下列之一：癌胚抗原（CEA）、糖类抗原125（CA-125）。
所属类别：	发明专利