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原文传递一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法及应用

专利名称：	一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法及应用
摘要：	本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法，PdCu纳米线功能化多孔石墨烯作为电化学信号发放大平台来构建无标记型电化学免疫传感器，实现了对乙肝e抗原的定量检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低等优点，对乙型肝炎的检测具有重要的科学意义和应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东理工大学
发明人：	刘青;谭召灵;刘会;董慧;颜芹;董云会
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-07-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910397970.2
公开号：	CN110058020A
分类号：	G01N33/574(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园A座313室
主权项：	1.一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的制备：将单独制备的PdCu纳米线和多孔石墨烯结合；（2）构建无标记型PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器，测定乙肝e抗原HBe Ag含量，绘制工作曲线。 2.根据权利要求1所述的一种检测乙肝e抗原HBe Ag的电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的制备具体如下： ① PdCu纳米线的制备在室温下，分别取0.5 ~ 1.5 mL的20 mmol/L四氯钯酸钠溶液，0.5 ~ 1.5 mL的20mmol/L氯化铜溶液，0.03 ~ 0.1 mL的6 mmol/L盐酸溶液，30 ~ 90 mg溴化钾和20 ~ 60.0mg聚醚F127，将其溶于去离子水中，然后向溶液中加入0.5 ~ 1.5 mL的0.1 mmol/L抗坏血酸溶液，将其在90 ℃的油浴中保持30 min，自然冷却至室温，在转速10000 rpm离心收集得到PdCu纳米线的水分散系； ② 多孔石墨烯的制备在连续超声下将0.33 ~ 1.0 g六水合三氯化铁与0.33 ~ 1.0 mL的5.0 mg/mL氧化石墨烯溶液混合1 h，然后，通过滤纸过滤混合物，将滤纸在60 ℃的真空烘箱中干燥，将带盖的滤纸放在锡箔上，用钳子放入马弗炉中，并在450 ℃下点火，然后，用钳子取出锡箔上的片材并自然冷却至室温，用超纯水离心10次直到上清液变为无色，将产物用乙醇洗涤之后，60 ℃下干燥过夜，用稀盐酸洗涤得到多孔石墨烯； ③ PdCu纳米线功能化多孔石墨烯纳米粒子的制备向20.0 mg制备的多孔石墨烯加入5.0 ~ 15.0 mL、1.0 mg/mL的PdCu纳米线分散液，将混合物超声1 h，离心后的黑色沉淀物在室温下干燥，将20.0 mg黑色粉末再分散在5.0 mL、pH=7.4的缓冲溶液中。 3.根据权利要求1所述的一种检测乙肝e抗原HBe Ag的电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的构建电化学免疫传感器，具体如下：（1）将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；（2）将6.0 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的PdCu纳米线功能化多孔石墨烯纳米粒子的分散液滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；（3）将6.0 µL、5 ~ 15 µg/mL的乙肝e抗体滴加到电极表面，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中干燥；（4）继续将3.0 µL、1~ 2 mg/mL的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中晾干；（5）继续滴加6.0 µL、0.1 pg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的乙肝e抗原Hbe Ag溶液，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗，4.0 ℃冰箱中干燥，制得一种无标记型电化学免疫传感器。 4.根据权利要求1所述的一种检测乙肝e抗原HBe Ag的电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的测定乙肝e抗原HBe Ag，绘制工作曲线，具体如下： ① 在三电极体系下进行测试，以饱和甘汞电极为参比电极，以铂丝电极为对电极，以所制备的免疫传感器为工作电极，采用10 mL、50 mmol/L的pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液配制不同浓度的乙肝e抗原HBe Ag溶液，将6 µL不同浓度的乙肝e抗原HBe Ag溶液分别滴涂至电极表面，反应0.5 ~ 2 h，晾干后连接至电化学工作站中，分别将电极浸于pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中测定其氧化还原电流变化，当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50mmol/L的pH=7.0磷酸盐缓冲溶液中注入10 µL、5 mol/L的过氧化氢溶液，记录电流变化； ② 根据所得电流差值与乙肝e抗原HBe Ag浓度呈线性关系，绘制工作曲线； ③ 利用工作曲线法，得到待测样品中乙肝e抗原HBe Ag的浓度。
所属类别：	发明专利