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原文传递稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株及其应用

专利名称：	稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株及其应用
摘要：	本发明公开了一对稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株，其中一株是中国仓鼠卵巢细胞株CHO/3A2，其能产生抗体3A2，另一株是中国仓鼠卵巢细胞株CHO/5H7，其能产生抗体5H7，所述细胞株已于2018年12月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保存编号依次为CCTCC NO.C2018188与NO.C2018226。实验证实利用本发明的两株细胞制备抗体量约为2g/L，较之前杂交瘤细胞的产量提高100倍，且抗体敏感性与之前的单克隆抗体一致，其组成抗体对与HCV‑cAg特异性结合，可进行ELISA检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东莱博生物科技有限公司
发明人：	朱之炜;陈文丽;唐晓龙;任素平;陈振;解光宁;欧兰香;王佳颖;王岩;张增丽;于晓杰
专利状态：	有效
申请日期：	2018-12-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201811641675.9
公开号：	CN109738648A
代理机构：	济南金迪知识产权代理有限公司
代理人：	陈桂玲
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	250101 山东省济南市高新区大正路1777号
主权项：	1.一对稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株，该工程细胞株是以中华仓鼠卵巢细胞(CHO)作为宿主细胞，转染含有HCV-cAg单克隆抗体基因的表达质粒后经筛选获得；其特征在于：所述第一工程细胞株命名为中国仓鼠卵巢细胞株CHO/3A2，其能分泌产生丙型肝炎病毒核心抗原抗体3A2，该细胞株已于2018年12月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保存编号为：CCTCC NO.C2018188；所述第二工程细胞株命名为中国仓鼠卵巢细胞株CHO/5H7，其能分泌产生丙型肝炎病毒核心抗原抗体5H7，该细胞株已于2018年12月12日保藏于中国典型培养物保藏中心，保存编号为：CCTCC NO.C2018226。 2.用于构建权利要求1所述工程细胞株的真核细胞外源基因表达系统，其特征在于：所述表达系统包括真核表达载体和HCV-cAg抗体基因或编码该HCV-cAg氨基酸序列或其抗原结合片段的核酸分子，其中所述真核表达载体选pBudCE4.1或pcDNA3.1，且该质粒带有Zeocin抗性作为筛选标签，该筛选标签能够通过转染DNA的方法导入细胞。 3.根据权利要求2所述的真核细胞外源基因表达系统，其特征在于：所述表达系统选择表达载体pBUDCE4.1-H1-L1，命名为pBudCE4.1-3A2和表达载体pBUDCE4.1-H2-L2，命名为pBudCE4.1-5H7；其中pBudCE4.1-3A2的核苷酸序列如SEQ NO.9所示，pBudCE4.1-5H7的核苷酸序列如SEQ NO.10所示。 4.根据权利要求2所述的真核细胞外源基因表达系统，其特征在于：所述HCV-cAg抗体基因分别是编码命名为单克隆抗体2G7的核酸分子，同时也是编码基因工程抗体丙型肝炎病毒核心抗原抗体3A2的核酸分子，其轻链的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示，其重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，其中所述单克隆抗体2G7产生于CCTCC NO.C2018229的杂交瘤细胞株；或是编码命名为单克隆抗体6A2的核酸分子，同时也是编码基因工程抗体丙型肝炎病毒核心抗原抗体5H7的核酸分子，其轻链的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示，其重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，其中所述单克隆抗体6A2产生于CCTCC NO.C2018230的杂交瘤细胞株；所述两株杂交瘤细胞株已于2018年12月12日保藏于中国典型培养物保藏中心。 5.权利要求1所述的一对稳定高效表达丙型肝炎病毒核心抗原抗体的工程细胞株在制备丙型肝炎病毒核心抗原抗体中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：培养工程细胞时能够显著提高抗体产量的专用培养基配方是：CHO-S-SFM II干粉培养基10g/L，NaHCO3 2.40～2.45g/L，7～8mM谷氨酰胺，2±0.2mM柠檬酸铁，最终pH为7.0～7.2；该培养基命名为CHO-Med-01；培养工程细胞时采用的补料方式是：于第1、3、5、7、9或11天分别依次补加终浓度为7ml/L、8ml/L、9ml/L、10ml/L、9ml/L、8ml/L的FeedA。 7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：培养工程细胞时能够显著提高抗体产量的专用培养基配方是：CHO-S-SFM II干粉培养基10g/L，NaHCO3 2.45g/L，8mM谷氨酰胺，2mM柠檬酸铁，最终pH为7.1。 8.权利要求1所述的一对工程细胞株分泌产生的丙型肝炎病毒核心抗原抗体对，该基因工程抗体对包括独立存放的第一基因工程抗体和第二基因工程抗体；其特征在于：所述第一基因工程抗体命名为丙型肝炎病毒核心抗原抗体3A2，由中国仓鼠卵巢细胞株CHO/3A2细胞分泌产生，其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其重链的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示；所述第二基因工程抗体命名为丙型肝炎病毒核心抗原抗体5H7，由中国仓鼠卵巢细胞株CHO/5H7细胞分泌产生，其轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。 9.权利要求8所述的丙型肝炎病毒核心抗原抗体对作为包被抗体和检测抗体配对使用在制备HCV-cAg的ELISA检测试剂或试剂盒中的应用。 10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述包被抗体选第一基因工程抗体3A2，所述检测抗体选第二基因工程抗体5H7；应用时ELISA检测板上包被有第一基因工程抗体3A2，酶稀样品中含有HRP标记的第二基因工程抗体5H7，所述第一基因工程抗体和所述第二基因工程抗体配对使用。
所属类别：	发明专利