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原文传递一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法及检测卡

专利名称：	一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法及检测卡
摘要：	本发明涉及丙肝病毒检测领域，公开了一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法及检测卡，采用双抗体与双抗原夹心法检测丙型肝炎病毒抗原抗体，将待测样本与样本稀释液混合，样本中的HCV抗体与HCV核心抗原分别跟生物素标记抗原和生物素标记抗体反应，再取混合后的样本一次性加入试纸卡中，以此实现对HCV抗原抗体的联合检测。本发明不仅避免了HCV抗原抗体之间的相互干扰，一次性检测HCV抗原抗体，而且能区分HCV抗原阳性、HCV抗体阳性，或二者同为阳性，提高了HCV病毒检测的准确度和灵敏度，可用于HCV的早期筛查与临床的辅助诊断，以弥补HCV抗体诊断试剂盒在感染“窗口期”的漏检，达到HCV抗体检测与HCV抗原检测的互补效果，既提高了工作效率，又节约了成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	湖南康润药业股份有限公司
发明人：	胡道奇;周松辉;周咏武;吴刚强;童鹏;李光;聂东宋
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-22T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-16T00:00:00+0800
申请号：	CN201910431103.6
公开号：	CN110133269A
代理机构：	长沙睿翔专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	周松华;孙建霞
分类号：	G01N33/577(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	414000 湖南省岳阳市巴陵东路380号
主权项：	1.一种丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法，其特征在于，包括： S1、使用生物素标记HCV嵌合抗原； S2、使用生物素标记HCV核心抗原单克隆抗体； S3、使用量子点偶联链霉亲和素； S4、使用量子点偶联兔抗鸡IgY； S5、制备样品垫处理液并用该样品垫处理液对样品垫进行处理； S6、将步骤S3制得的量子点偶联的链霉亲和素、步骤S4制得的量子点偶联的兔抗鸡IgY分别按一定的浓度稀释至同一缓冲液中并混匀，将该混合液体喷制在步骤S5所得的样品垫上，真空干燥； S7、将NC膜贴至PVC板上，再将HCV核心抗原单克隆抗体、HCV嵌合抗原与鸡IgY按一定浓度分别包被NC膜，依次作为检测T1线、T2线和质控C线； S8、对步骤S6制得的样品垫进行裁剪并与吸水纸贴至步骤S7所得的PCV板上。 2.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括： S100、将HCV嵌合抗原置于PH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液中充分浸泡，并将所得混合液体置于温度为2～8℃的环境下透析2～4h； S101、取适量生物素并与预冷的超纯水配制成浓度为5mg/ml的生物素溶液； S102、按生物素与HCV嵌合抗原为固定摩尔比添加步骤S101制得的生物素溶液与步骤S100制得的HCV嵌合抗原制得混合液体，并将该混合液体置于温度为2～8℃的环境下透析2～4h，所述摩尔比为50:1； S103、将步骤S102透析制得的生物素标记的抗原结合物取出并加入等体积的甘油，并置于-20℃的环境下保存备用。 3.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S2包括： S200、将HCV核心抗原单克隆抗体置于PH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液中充分浸泡，并将所得混合液体置于温度为2～8℃的环境下透析2～4h； S201、取适量生物素并与预冷的超纯水配制成浓度为5mg/ml的生物素溶液； S202、按生物素与HCV核心抗原单克隆抗体为固定摩尔比添加步骤S201制得的生物素溶液与步骤S200制得的HCV核心抗原单克隆抗体制得混合液体，并将该混合液体置于温度为2～8℃的环境下透析2～4h，所述摩尔比为50:1； S203、将步骤S202透析制得的生物素标记的抗原结合物取出并加入等体积的甘油，并置于-20℃的环境下保存备用。 4.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S3包括： S300、将NHS与EDC分别以0.5mg/mg与0.2mg/mg的质量比与量子点混合，室温反应10～30min； S301、将步骤S300所得混合液体置于10000～15000prm环境下离心10～20min，弃去上清液并向下层沉淀添加pH为7.5～8.5的碱性缓冲液进行溶解，混匀后冰浴超声3～5min； S302、将链霉亲和素以0.1～1mg/mg的质量比与量子点混合，室温旋转反应2h； S303、加入终浓度为1％的牛血清白蛋白，室温反应20～30min； S304、将步骤S303所得的混合液体置于10000～15000prm环境下离心10～20min，弃去上清液并向下层沉淀添加含1％牛血清白蛋白与0.1％吐温20进行溶解，置于2～8℃下保存备用。 5.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S4包括： S400、将NHS与EDC分别以0.5mg/mg与0.2mg/mg的质量比与量子点混合，室温反应10～30min； S401、将步骤S400所得混合液体置于10000～15000prm环境下离心10～20min，弃去上清液并向下层沉淀添加pH为7.5～8.5的碱性缓冲液进行溶解，混匀后冰浴超声3～5min； S402、将兔抗鸡IgY以0.1～1mg/mg的质量比与量子点混合，室温旋转反应2h； S403、加入终浓度为1％的牛血清白蛋白，室温反应20～30min； S404、将步骤S403所得的混合液体置于10000～15000prm环境下离心10～20min，弃去上清液并向下层沉淀添加含1％牛血清白蛋白与0.1％吐温20进行溶解，置于2～8℃下保存备用。 6.根据权利要求1所述的丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤步骤S5中的样品垫为玻璃纤维素膜，其处理过程包括： S500、使用样品垫处理液对样品垫进行浸泡处理； S501、取出步骤S500中浸泡过的样品垫并将其置于37℃干燥12～24h； S502、将步骤S502所得的样品垫置于37℃干燥12～24h。 7.一种检测卡，包括卡壳上盖(1)和卡壳下盖(6)，所述卡壳上盖(1)上开设有加样孔(2)和检测观察孔(5)，所述卡壳上盖(1)和卡壳下盖(6)之间设有试纸条，其特征在于：所述试纸条包括PVC底板(8)、样品垫(9)、吸水纸(10)和NC膜(11)，所述样品垫(9)、吸水纸(10)和NC膜(11)安装在PVC底板(8)的上表面，且NC膜(11)位于样品垫(9)和吸水纸(10)之间，所述NC膜(11)上设有质控线C线(12)、检测T1线(13)和检测T2线(14)，所述质控线C线(12)、检测T1线(13)和检测T2线(14)使用权利要求1至6任意一项权利要求所制得的处理后的HCV核心抗原单克隆抗体、HCV嵌合抗原与鸡IgY进行包被处理。 8.根据权利要求7所述的检测卡，其特征在于：所述卡壳下盖(6)上设有用于对试纸条进行限位的一对限位槽(7)，所述限位凹槽(7)内设有凸点(15)。 9.根据权利要求7所述的检测卡，其特征在于：所述卡壳上盖(1)和卡壳下盖(6)通过固定栓(3)连接。 10.根据权利要求7所述的检测卡，其特征在于：所述卡壳上盖(1)和检测观察孔(5)之间设有截流板(4)。
所属类别：	发明专利