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原文传递甘胆酸抗原、抗体、检测试剂制备方法及检测方法

专利名称：	甘胆酸抗原、抗体、检测试剂制备方法及检测方法
摘要：	本发明涉及医学检验技术领域，具体涉及一种甘胆酸抗原、抗体、检测试剂制备方法及检测方法，检测时，样本中的甘胆酸小分子与试剂R2中的甘胆酸‑载体蛋白复合物竞争结合试剂R1中的甘胆酸抗体，反应度与样本中的甘胆酸浓度成反比，甘胆酸浓度越高，反应度越低，通过测定600nm处的吸光度，建立校准曲线，计算血清样本中甘胆酸的浓度；并通过添加硫酸葡聚糖进一步提高试剂抗干扰能力，可以降低甘胆酸类似物干扰。在整个过程制备简易，成本低廉，且灵敏度高，在体外诊断方面具有良好的应用价值。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广西;45
申请人：	桂林优利特医疗电子有限公司
发明人：	苏钰清;苟文来
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-02T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202310965181.0
公开号：	CN117129666A
代理机构：	北京中济纬天专利代理有限公司
代理人：	石燕妮
分类号：	G01N33/53;G01N33/531;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;C07K16/06;G01N21/31;G;C;G01;C07;G01N;C07K;G01N33;C07K14;C07K16;G01N21;G01N33/53;G01N33/531;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/44;C07K16/06;G01N21/31
申请人地址：	541004 广西壮族自治区桂林市高新区信息产业园D-07号
主权项：	1.一种甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：制备试剂R1，其中，所述试剂R1包括磷酸氢二钠6g/L，磷酸二氢钠1g/L，氯化钠5～9g/L，2.5～5g/L吐温-20，叠氮化钠1g/L，EDTA·2Na1～2g/L，抗甘胆酸抗体0.65g/L，葡聚糖1g/L和PEG600030g/L；制备试剂R2；制备标准品；将所述试剂R1、所述试剂R2和所述标准品组合，获得甘胆酸检测试剂。 2.如权利要求1所述的甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，制备试剂R2，所述方法还包括：按1mL10％固含量胶乳加纯化水稀释至5％固含量，在磁力搅拌器上搅拌均匀；按每毫升胶乳加入0.015g的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，磁力搅拌反应30分钟；按每毫升胶乳加入10～12mg甘胆酸抗原，并磁力搅拌反应2.5小时；反应完成后，按每毫升胶乳加入适量封闭液，并磁力搅拌反应2小时，反应完毕后，即完成包被；取包被完成的致敏胶乳，用1.5mL离心管分装，进行12000rpm，4℃离心30分钟；超声稀释后获得所述试剂R2。 3.如权利要求1所述的甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，制备标准品，所述方法还包括：称取适量甘氨胆酸水合物溶于PBS缓冲液中，配成浓度为80mg/L高浓度校准品，并对倍稀释，获得各点校准品。 4.一种甘胆酸抗原制备方法，适用于如权利要求1所述的甘胆酸检测试剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将51mg固体甘胆酸完全溶解于1.5mL二甲基甲酰胺溶液中；向溶液中分别加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺28.76mg和N-羟基琥珀酰亚胺17.25mg，并在室温下避光搅拌过夜；在4℃，1000rpm，离心10min分离得到的上清液；将5.5μmol牛血清白蛋白或鸡卵清白蛋白用纯化水溶解至10mg/mL左右并逐滴加入，室温下搅拌反应4h，偶联反应后，将溶液完全装入透析袋中，置于PBS缓冲液中进行透析；在4℃透析3天，以每天两次更换未结合的甘胆酸，所得的复合物甘胆酸-牛血清白蛋白用作抗原，甘胆酸-鸡卵清白蛋白作为包被抗原。 5.一种抗体制备方法，适用于如权利要求4所述的甘胆酸抗原制备方法，其特征在于，包括以下步骤：用PBS缓冲液将合成的甘胆酸-牛血清白蛋白抗原稀释至1mg/mL，得到抗原溶液；用1.0mL抗原溶液与弗式完全佐剂进行混合，对实验动物兔进行初次免疫；初次免疫后，再用1.0mL相同的抗原溶液与弗式不完全佐剂进行加强免疫，间隔10～14天，再经2～3次以上的加强免疫；对动物进行血清采集，并进行抗血清滴度测定，达到理想滴度后，分离纯化获得抗甘胆酸抗体。 6.一种甘胆酸检测方法，适用于如权利要求5所述的抗甘胆酸抗体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：向6μL甘胆酸检测样品中加入160μL的甘胆酸试剂R1，混匀，在37℃孵育2分钟；加入80μL试剂R2，混匀，37℃孵育约30秒后，读取吸光度值A1，孵育约5分钟，读取吸光度值A2；计算两次吸光度变化值，进而计算出样品中的甘胆酸的浓度。
所属类别：	发明专利