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原文传递一种甘胆酸测定试剂及其制备方法

专利名称：	一种甘胆酸测定试剂及其制备方法
摘要：	本发明提供了一种甘胆酸测定试剂及其制备方法；包括R1试剂、R2试剂和甘胆酸标准样；所述R1试剂是由促进剂及稳定剂相结合后溶解于添加有缓冲液的纯化水中所形成的溶液；所述R2试剂是由带有抗人CG抗体的胶乳颗粒溶解于添加有缓冲液、稳定剂、防腐剂的纯化水中所形成的溶液；所述的甘胆酸标准样是由5份参考校准样品：CG含量分别为1mg/ml、2mg/ml、5.0mg/ml、10.0mg/ml、20.0mg/ml。本发明通过将CG抗体与羧基胶乳微球结合，放大了CG抗原和抗体反应的表面积，不但准确性高、重复性好，而且检测快速，能够在常规生化仪上进行大批量样本测定，大大提高了检测工作效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州盛世康生物科技有限公司
发明人：	赵海峰;蒙凯;李俊英;李家维
专利状态：	有效
申请日期：	2019-04-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201910278422.8
公开号：	CN109917143A
分类号：	G01N33/92(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	550003 贵州省贵阳市贵安新区高端装备制造产业园南部园区标准厂房
主权项：	1.一种甘胆酸测定试剂，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和甘胆酸标准样；其中，所述R1试剂是由促进剂及稳定剂相结合后溶解于添加有缓冲液的纯化水中所形成的溶液；所述促进剂为PEG-6000，所述稳定剂为牛血清白蛋白；促进剂的浓度0.05-30g/L、稳定剂的浓度10mmol/L、缓冲液的浓度300mmol/L；所述R2试剂是由带有抗人CG抗体的胶乳颗粒溶解于添加有缓冲液、稳定剂、防腐剂的纯化水中所形成的溶液；缓冲液的浓度50mmol/L,稳定剂的浓度2-5mmol/L，防腐剂的浓度2-5mmol/L，带有抗人CG抗体的胶乳颗粒0.0005-0.01mg/ml；所述的甘胆酸标准样包括由5份形成系列浓度的参考校准样品：CG含量分别为1mg/ml、2mg/ml、5.0mg/ml、10.0mg/ml、20.0mg/ml，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液按着质量比为1:1:2混合制得。 2.一种如权利要求1所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，制备R1 试剂：向添加有缓冲液的纯化水中加入促进剂及稳定剂，搅拌至完全溶解；步骤二，制备R2 试剂： (1) 取羧基胶乳微球用缓冲液稀释成 0.01mg/ml 的悬浮液A； (2) 按1ml步骤（1）所述的羧基胶乳微球悬浮液加 20mg乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺和40mg 的N- 羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐，立即混匀后在室温将此混合物反应 10分钟，不断搅拌； (3)用缓冲液或纯化水洗涤经步骤（2）处理所得的羧基胶乳微球，除去未反应的NHS和EDAC，并将该羧基胶乳微球在纯化水中悬浮，得胶乳微球含量为 0.01mg/ml 的羧基胶乳微球悬浮液B； (4)将抗人甘胆酸抗体溶于缓冲液中，使抗人甘胆酸抗体的蛋白质浓度为0.25mg/ml； (5) 取步骤(3)中的羧基胶乳微球悬浮液B 1ml立即加入步骤(4)中抗人甘胆酸抗体1ml，得混合液；使该混合液中羧基胶乳微球、抗人甘胆酸抗体和缓冲液的含量分别为0.005mg/ml、0.125mg/ml、25mmol/L ； (6) 将步骤（3）的混合液在 40℃反应 3 小时，不断搅拌； (7)按1ml步骤（6）的混合液2.5μl乙醇胺的比例加入乙醇胺，然后反应10-30分钟，不断搅拌； (8) 离心处理除去未结合的蛋白质和乙醇胺，再用缓冲液稀释，使混合液中带有抗人CG抗体的胶乳颗粒的浓度为0.002-0.01mg/ml，然后加入稳定剂、防腐剂溶解混匀后即成；步骤三，所述甘胆酸标准样的配置： 5份参考校准样品：CG含量分别为1mg/ml、 2mg/ml、5.0mg/ml、10.0mg/ml、20.0mg/ml；按着配方将稳定剂及缓冲剂混合后得到混合液，然后再混合液中加入一定量的CG，获得单点浓度的CG参考校准品。 3.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述羧基胶乳微球的平均粒径为70-80nm。 4.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述羧基胶乳微球的平均粒径为75nm。 5.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述羧基胶乳微球为羧基含量在100μmol/g-1200μmol/g的乳胶微球。 6.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述羧基胶乳微球的PDI＜0.050。 7.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述羧基胶乳微球的材质为聚苯乙烯或表面无基团的乳胶微球。 8.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述抗人甘胆酸抗体是羊抗人甘胆酸抗体或兔抗人甘胆酸抗体。 9.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述抗人甘胆酸抗体是鼠抗人甘胆酸抗体或鸡抗人甘胆酸抗体。 10.如权利要求2所述的甘胆酸测定试剂的制备方法，其特征在于，所述离心处理采用离心机，离心机转速为30000 转/分。
所属类别：	发明专利