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原文传递一种筛选山茱萸降糖活性成分的方法

专利名称：	一种筛选山茱萸降糖活性成分的方法
摘要：	本发明涉及一种筛选山茱萸降糖活性成分的方法，包括如下步骤：用色谱‑质谱技术建立山茱萸水提物的成分分析方法，通过数据分析鉴定山茱萸中活性成分；将活性成分的化学结构和DrugBank数据库进行相似性对比，相似性打分卡值设定为0.8，得到成分靶标；检索疾病/证候靶标数据库，得到糖尿病的候选疾病靶标；采用网络药理学技术对山茱萸的化学成分进行相关的降糖作用靶标预测，构建山茱萸成分‑降糖靶点‑作用通路网络，预测其潜在的降糖活性成分及分子作用机制；通过细胞实验对潜在的活性成分进行活性评价和实验验证，从而明确山茱萸中真实有效的降糖活性成分；本发明提高了山茱萸活性成分筛选的效率，降低药物活性成分筛选成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	湖南中医药大学第一附属医院((中医临床研究所))
发明人：	龙红萍;任卫琼;蔺晓源;刘检
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-06T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910167185.8
公开号：	CN109738552A
代理机构：	北京风雅颂专利代理有限公司
代理人：	曾志鹏
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	410208 湖南省长沙市韶山中路95号
主权项：	1.一种筛选山茱萸降糖活性成分的方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)、用超高效液相色谱-电喷雾四极杆-飞行时间质谱技术建立山茱萸水提物的成分分析方法，并通过数据分析鉴定山茱萸中主要的活性成分； (2)、将活性成分的化学结构和DrugBank数据库进行相似性对比，相似性打分卡值设定为0.8，得到成分靶标； (3)、检索疾病/证候靶标数据库，得到糖尿病的候选疾病靶标； (4)、采用网络药理学技术对山茱萸的化学成分进行相关的降糖作用靶标预测，构建山茱萸成分-降糖靶点-作用通路网络，预测其潜在的降糖活性成分及分子作用机制； (5)、通过细胞实验对潜在的活性成分进行活性评价和实验验证，从而明确山茱萸中真实有效的降糖活性成分。 2.如权利要求1所述的山茱萸活性成分分析的方法，其特征在于，山茱萸水提物的成分分析方法，包括如下步骤： a.山茱萸样品溶液的制备； b.对照品溶液的制备； c.山茱萸化学成分液质分析；色谱条件：流动相A为乙腈，流动相B为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液，梯度洗脱程序：0～15min，3％～10％A；15～25min，10％～25％A；25～40min，25％～70％A；流速：0.3mL/min，进样量：1μL；质谱检测条件：离子化方式为电喷雾离子化，正负离子分析模式，MRE扫描方式，扫描检测，m/z 100～1500，除溶剂气体为氮气，干燥气温度为325℃；干燥气流速：6.8L/min；鞘气温度：350℃；毛细管电压：4.0kv；Fragment电压110V，扫描范围为50-1000； d.成分分析：通过UPLC-ESI-Q-TOF/MS对山茱萸的化学成分进行定性分析，得到ESI-MS的质谱总离子流图，采用Agilent Masshunter Qualitative Analysis工作站中的分子特征提取功能，通过设定合适的阈值参数，对山茱萸正负离子模式下采集到的总离子流图进行提取，获得化合物的准离子分子峰信息，根据供试品的色谱保留时间、质谱准分子离子峰和碎片离子信息，通过对SciFinder数据库、山茱萸属相关文献以及对照品信息进行数据分析。 3.如权利要求2所述的山茱萸活性成分分析的方法，其特征在于，所述山茱萸样品溶液的制备方法为，将山茱萸药材粉碎，称取5g，精密称定，加50mL75％甲醇超声提取3次，每次10min，合并提取液，减压回收甲醇至无醇味，冷冻干燥，加70％甲醇超声溶解，定容到50ml，8000rpm离心5min，取上清液，摇匀，经0.22μm有机微孔滤膜滤过，即得山茱萸样品溶液。 4.如权利要求2所述的山茱萸活性成分分析的方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备方法为，取5-羟甲基糠醛、獐牙菜苷、马钱苷、齐墩果酸对照品、槲皮素、山奈酚、胡萝卜苷、β-谷甾醇对照品各2.0mg，精密称定，分别置于10mL容量瓶中，加适量70％甲醇超声溶解，并以70％甲醇定容，制成浓度为200ug/mL的对照品贮备液，进样前将对照品贮备液用70％甲醇稀释10倍，经0.22μm有机微孔滤膜滤过。 5.如权利要求1-4任一项所述的山茱萸活性成分分析的方法，其特征在于，检索疾病/证候靶标数据库的检索关键词为：“diabetes mellitus”、“diabetes”。 6.如权利要求1或2所述的山茱萸活性成分分析的方法，其特征在于，构建山茱萸成分-降糖靶点-作用通路网络的方法为，将山茱萸所含成分靶标和已知与糖尿病相关的疾病靶标之间的相互作用关系对提取出来，在PPI数据库获得蛋白质-蛋白质相互作用数据；以网络中节点拓扑结构特征值“节点连接度”的2倍中位数为卡值，选取中药靶标-疾病蛋白互作网络的核心节点，将筛选到与糖尿病相关的关键靶标，构建成分靶标-疾病靶标核心网络图，并通过KEGG数据库中对这些核心靶标进行通路富集分析，选取其中具有统计学意义及富集基因数量大于等于7的条目，得到关键核心靶标参与的关键通路信息；将中药与中药成分之间关系，中药成分与关键核心靶标相互作用关系，关键核心靶标与富集的关键通路相互作用关系，建立起“中药-成分-靶标-通路”关系网络。 7.如权利要求1或2所述的山茱萸活性成分分析的方法，其特征在于，所述细胞实验为Hep G2细胞葡萄糖摄取、增殖以及对Hep G2细胞胰岛素抵抗模型摄取葡萄糖的影响实验。
所属类别：	发明专利