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原文传递一种多激素联合定量检测卡及其制备方法和使用方法

专利名称：	一种多激素联合定量检测卡及其制备方法和使用方法
摘要：	本发明公开了一种多激素联合定量检测卡及其制备方法和使用方法，包括底卡和面卡，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；与检测区一一对应连接的废液区；所述结合区及检测区的底部均并联有微通道；所述微通道连接时间阀；所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。本发明通过微流控技术控制待测样品的流速和流量，具有同一种标志物的多激素通过一条微通道进入检测区，避免相互干扰，从而减少误差，增加反应灵敏度；将待测样品制备成水包水微液滴，增大检测限度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	周辉
发明人：	周辉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910156300.1
公开号：	CN109752538A
代理机构：	芜湖安汇知识产权代理有限公司
代理人：	尹婷婷
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	241000 安徽省芜湖市经济技术开发区科创中心软件园0123室
主权项：	1.一种多激素联合定量检测卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上设有：加样区，与加样区连接的多个结合区，通过时间阀与结合区一一对应连接的多个检测区；与多个检测区一一对应直接连接的多个废液区；所述结合区、检测区及废液区的底部均并联有微通道；所述结合区及检测区底部并联的微通道均连接时间阀；所述面卡上设有加样孔和观察孔，加样孔的位置与底卡加样区对应，观察孔的位置与底卡检测区对应。 2.根据权利要求1所述的多激素联合定量检测卡，其特征在于，所述结合区和检测区均为3个，结合区A、B、C分别喷涂有荧光微球A标记的抗抗睾酮抗体、荧光微球B标记的抗雌二醇抗体、荧光微球C标记的抗催乳素抗体；检测区A、B、C分别包被有抗睾酮抗体、抗雌二醇抗体、抗催乳素抗体。 3.根据权利要求1或2所述的多激素联合定量检测卡，其特征在于，所述加样区覆盖圆形滤纸；所述圆形滤纸直径为1.5-2.0cm、孔径为1-3μm。 4.根据权利要求1或2所述的多激素联合定量检测卡，其特征在于，所述微通道通过软光刻技术和微流控芯片技术制备，所述微通道孔径为10-15μm；所述时间阀孔径为5μm。 5.根据权利要求1或2所述的多激素联合定量检测卡，其特征在于，所述的底卡和面卡材质为PDMS；所述底卡和面卡的背面扣合连接。 6.根据权利要求1-5任意一项所述的多激素联合定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤： (1)底卡的制备： (1-1)制图； (1-2)掩模； (1-3)光刻； (1-4)再铸模； (1-5)软光刻； (2)在底卡的结合区分别喷涂荧光微球标记的抗体； (3)在底卡的检测区分别包被抗体； (4)在加样区和废液区覆盖滤纸； (5)将所述底卡和面卡的背面扣合连接。 7.根据权利要求6所述的多激素联合定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括以下步骤： (1-1)制图：微通道图形按照设计通过绘图软件绘制掩膜版图； (1-2)掩模：制成掩膜版图后，打印在透明胶片上制得光刻掩膜板,利用此掩膜板通过光刻工艺制作硅片模具； (1-3)光刻：在基片表面镀上一层阻挡层，再用甩胶机在阻挡层上均匀地甩上一层光敏材料-光刻胶；在光掩模上制备所需的通道图案；将光掩模复盖在基片上，用紫外光照射涂有光刻胶的基片，光刻胶发生光化学反应；用光刻胶配套显影液通过显影的化学方法除去经曝光的光刻胶；烘干后，利用未曝光的光刻胶的保护作用，采用化学腐蚀的方法在阻挡层上精确腐蚀出底片上平面二维图形，制成所需硅片模具； (1-4)再铸模：通过将弹性材料涂于光刻形成的硅片模具表面，干燥后取下则硅片模具表面上图形转移到弹性材料上形成印模； (1-5)软光刻：将PDMS前聚体与固化剂按10:1比例混合，搅拌混匀后，置于真空箱内脱除气泡，然后在印模上浇注，PDMS前聚体在印模上完全摊平后，将其连同印模一起放入烘箱内进行固化，置于80℃烘箱固化约48小时，之后将PDMS基片从印模上剥离下来。 8.根据权利要求1-5任意一项所述的多激素联合定量检测卡的使用方法，其特征在于，包括以下步骤： (a)将血清标准品包裹成5μm的水包水微液滴，配制成5个以上的一系列浓度，用同一批次的数张检测卡检测各浓度的标准品溶液，以检测区的荧光强度为纵坐标，血清标准品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并将标准曲线保存在多色荧光分析仪中； (b)样品检测:以与步骤(a)中同样的方法将待测样品包裹成5μm的水包水微液滴，平放检测卡，待测样品平衡至室温后，用已灭菌的胶头滴管吸取一定量待测样品加入加样孔中，立即将检测卡放入多色荧光检测仪中，记录荧光微球在最佳激发光源的激发下所发出的荧光值； (c)将所得数值代入已保存在多色荧光分析仪中的标准曲线，根据公式计算得到样本中待测物的浓度。 9.根据权利要求8所述的多激素联合定量检测卡的使用方法，其特征在于，所述步骤(a)中，将血清标准品包裹成5μm的水包水微液滴的具体步骤为：将含有葡聚糖、海藻糖和明胶的水溶液A加入到含有聚乙二醇的水溶液B中形成原纤维网络，然后加入1wt％鸡蛋清溶菌酶在60℃进行热孵化，最后将血清标准品加入其中，即可制备得到5μm的水包水微液滴。 10.根据权利要求9所述的多激素联合定量检测卡的使用方法，其特征在于，所述水溶液A中，葡聚糖、海藻糖、明胶的质量百分比浓度分别为1.5wt％、0..5wt％、0..5wt％；所述水溶液B中，聚乙二醇的质量百分比浓度为6.5wt％。
所属类别：	发明专利