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原文传递一种妇科肿瘤细胞联合定量检测卡及其制备方法和使用方法

专利名称：	一种妇科肿瘤细胞联合定量检测卡及其制备方法和使用方法
摘要：	本发明公开了一种妇科肿瘤细胞联合定量检测卡及其制备方法和使用方法，包括底卡和面卡，所述底卡上设有：加样区，结合区，微通道，时间阀，检测区以及废液区，所述加样区位于微通道的一端，所述结合区通过微通道和时间阀连接多个检测区位于微通道的另一端，所述废液区通过微通道连接至加样区，所述结合区及检测区的底部均并联有微通道；所述微通道连接时间阀；本发明通过微流控技术控制待测样品的流速和流量，具有同一种标志物的循环肿瘤细胞通过一条微通道进入检测区，避免相互干扰，从而减少误差，增加反应灵敏度；将待测样品制备成水包水微液滴，增大检测限度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	周辉
发明人：	周辉
专利状态：	有效
申请日期：	2019-03-01T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201910156317.7
公开号：	CN109752542A
代理机构：	芜湖安汇知识产权代理有限公司
代理人：	尹婷婷
分类号：	G01N33/558(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	241000 安徽省芜湖市经济技术开发区科创中心软件园0123室
主权项：	1.一种妇科肿瘤细胞联合定量检测卡，包括底卡和面卡，其特征在于，所述底卡上设有：加样区，结合区，微通道，时间阀，检测区以及废液区，所述加样区位于微通道的一端，所述结合区通过微通道和时间阀连接多个检测区位于微通道的另一端，所述废液区通过微通道连接至加样区。 2.根据权利要求1所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡，其特征在于，所述结合区为多个。 3.根据权利要求1或2所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡，其特征在于，结合区A通过微通道和时间阀连接检测区A1、A2、A3、A4、A5、A6；结合区B通过微通道和时间阀连接检测区B1、B2、B3；结合区C通过微通道和时间阀连接检测区C1、C2。 4.根据权利要求1或2所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡，其特征在于，所述结合区、检测区及废液区的底部均并联有微通道；所述结合区及检测区底部并联的微通道均连接时间阀。 5.根据权利要求3所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡，其特征在于，所述结合区A喷涂有荧光微球A1标记的抗SCC抗体、荧光微球A2标记的抗CEA抗体、荧光微球A3标记的抗TPA抗体、荧光微球A4标记的抗HCG抗体、荧光微球A5标记的抗AFP抗体、荧光微球A6标记的抗SF抗体；所述结合区B喷涂有荧光微球B1标记的抗CA125抗体、荧光微球B2标记的抗CA72-4抗体、荧光微球B3标记的抗CA19-9抗体；所述结合区C喷涂有荧光微球C1标记的抗HE4抗体、荧光微球C2标记的抗VEGF抗体；所述检测区A1、A2、A3、A4、A5、A6、B1、B2、B3、C1、C2分别包被有抗SCC抗体、抗CEA抗体、抗TPA抗体、抗HCG抗体、抗AFP抗体、抗SF抗体、抗CA125抗体、抗CA72-4抗体、抗CA19-9抗体、抗HE4抗体、抗VEGF抗体。 6.根据权利要求1或2所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡，其特征在于，所述微通道孔径为10-15μm；所述时间阀孔径为8μm。 7.根据权利要求1-6任意一项所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤： (1)底卡的制备： (1-1)制图； (1-2)掩模； (1-3)光刻； (1-4)再铸模； (1-5)软光刻； (2)在底卡的结合区分别喷涂荧光微球标记的抗体； (3)在底卡的检测区分别包被抗体； (4)在加样区覆盖滤纸； (5)将所述底卡和面卡的背面扣合连接。 8.利用权利要求1-6任意一项所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡的使用方法，其特征在于，包括以下步骤： (a)将血清标准品包裹成8μm的水包水微液滴，配制成5个以上的一系列浓度，用同一批次的数张检测卡检测各浓度的标准品溶液，以检测区的荧光强度为纵坐标，血清标准品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线并将标准曲线保存在多色荧光分析仪中； (b)样品检测:以与步骤(a)中同样的方法将待测样品包裹成8μm的水包水微液滴，平放检测卡，待测样品平衡至室温后，用已灭菌的胶头滴管吸取一定量待测样品加入加样孔中，立即将检测卡放入多色荧光检测仪中，记录荧光微球在最佳激发光源的激发下所发出的荧光值； (c)将所得数值代入已保存在多色荧光分析仪中的标准曲线，根据公式计算得到样本中待测物的浓度。 9.根据权利要求8所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡的使用方法，其特征在于，所述步骤(a)中，将血清标准品包裹成8μm的水包水微液滴的具体步骤为：将含有葡聚糖、海藻糖和明胶的水溶液A加入到含有聚乙二醇的水溶液B中形成原纤维网络，然后加入1wt％鸡蛋清溶菌酶在60℃进行热孵化，最后将血清标准品加入其中，即可制备得到8μm的水包水微液滴。 10.根据权利要求9所述的妇科肿瘤细胞联合定量检测卡的使用方法，其特征在于，所述水溶液A中，葡聚糖、海藻糖、明胶的质量百分比浓度分别为1.5wt％、0..5wt％、0..5wt％；所述水溶液B中，聚乙二醇的质量百分比浓度为6.5wt％。
所属类别：	发明专利