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原文传递检测生物分子间相互作用及其调控因子的成套试剂与应用

专利名称：	检测生物分子间相互作用及其调控因子的成套试剂与应用
摘要：	本发明公开了检测生物分子间相互作用及其调控因子的成套试剂与应用。本发明公开的成套试剂由名称分别为A、B和C的三种试剂组成；A由名称为R的生物分子和名称为X的生物分子连接而成；B含有名称为L的生物分子；R与L相同或不同且二者间具有相互作用，R与L相互作用后发生相变；C由名称为甲的报告基团与名称为XL的生物分子连接而成；X为蛋白质、核酸或多糖；XL为蛋白质、核酸或多糖。本发明通过将微观的蛋白互作及其调控等生化过程转化为直观的荧光信号强度变化，可视性强；操作过程简单易行且成本低廉；还具有灵敏度高、适用性广等特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	清华大学
发明人：	李丕龙;周敏;李维平;李剑;王亮;吴荣波;王静;陈鹤
专利状态：	有效
申请日期：	2018-05-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-14T00:00:00+0800
申请号：	CN201810455538.X
公开号：	CN109752557A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅
分类号：	G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100084 北京市海淀区北京市100084信箱82分箱清华大学专利办公室
主权项：	1.成套试剂，由名称分别为A、B和C的三种试剂组成；所述A由名称为R的生物分子和名称为X的生物分子连接而成；所述B含有名称为L的生物分子；所述R与所述L相同或不同且二者间具有相互作用，所述R与所述L相互作用后发生相变；所述C由名称为甲的报告基团与名称为XL的生物分子连接而成；所述X为蛋白质、核酸或多糖；所述XL为蛋白质、核酸或多糖。 2.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述X与所述XL间是否具有相互作用未知，所述成套试剂用于检测或辅助检测所述X与所述XL间是否具有相互作用。 3.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述X与所述XL间具有相互作用，所述成套试剂用于鉴定或辅助鉴定所述X与所述XL间相互作用的调控因子。 4.根据权利要求1-3中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R含有名称为结合区1的结合区；所述L含有名称为结合区2的结合区；所述R与所述L间的相互作用通过所述结合区1和所述结合区2进行，所述R中所述结合区1和所述L中所述结合区2的个数均大于等于2。 5.根据权利要求1-4中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R为蛋白质、核酸或多糖；和/或，所述L为蛋白质、核酸或多糖。 6.根据权利要求1-5中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述A中还连接有名称为乙的报告基团；和/或，所述B中还连接有名称为丙的报告基团。 7.根据权利要求6所述的成套试剂，其特征在于：所述乙和所述丙相同或不同；和/或，所述甲不同于所述乙和所述丙。 8.根据权利要求6或7所述的成套试剂，其特征在于：所述甲、所述乙和所述丙均为荧光报告基团；和/或，所述甲、所述乙和所述丙均为荧光蛋白质。 9.根据权利要求1-8中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述A中所述X和所述R的个数比为大于等于1的整数。 10.根据权利要求1-9中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R为由R单体形成的多聚体，所述R单体均含有名称为mr的单体，大于等于两个的所述mr能形成多聚体；和/或，所述L为由L单体形成的多聚体，所述L单体均含有名称为ml的单体，大于等于两个的所述ml能形成多聚体；所述mr与所述ml相同或不同。 11.根据权利要求10所述的成套试剂，其特征在于：所述R中至少有一个单体含有所述结合区1；和/或，所述L中至少有一个单体含有所述结合区2。 12.根据权利要求10或11所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体均含有所述mr和所述结合区1；和/或，所述L单体均含有所述ml和所述结合区2。 13.根据权利要求12所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体中，所述mr与所述结合区1或含有所述结合区1的生物分子通过连接区或化学键相连；和/或，所述L单体中，所述ml与所述结合区2或含有所述结合区1的生物分子通过所述连接区或化学键相连。 14.根据权利要求12或13所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体均还含有所述乙；和/或，所述L单体均还含有所述丙。 15.根据权利要求14所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体中，所述mr、所述乙与所述结合区1或含有所述结合区1的生物分子通过所述连接区或化学键相连；和/或，所述L单体中，所述ml、所述丙与所述结合区2或含有所述结合区2的生物分子通过所述连接区或化学键相连。 16.根据权利要求10-15中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体均相同，所述L单体均相同；和/或，所述mr与所述ml均为酵母蛋白SmF；和/或，所述结合区1为序列1的第364-431位所示的SH3中与序列5的第366-380位所示的PRMH结合的区域；所述结合区2为序列5的第366-380位所示的PRMH中与序列1的第364-431位所示的SH3结合的区域；和/或，所述连接区为(Gly-Gly-Ser)n或含有(Gly-Gly-Ser)n的多肽，n为大于等于2的自然数；和/或，所述甲为红色荧光蛋白；和/或，所述乙和所述丙为绿色荧光蛋白。 17.根据权利要求13-16中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述mr与所述ml均为序列1的第17-102位所示的酵母SmF；和/或，所述含有所述结合区1的生物分子为序列1的第364-431位所示的SH3；和/或，所述含有所述结合区2的生物分子为序列5的第366-380位所示的PRMH。 18.根据权利要求10-17中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体为H1)或H2)或H3)： H1)氨基酸序列是序列1的第17-431位所示的蛋白质； H2)将序列表中序列1的第17-431位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质； H3)在H1)或H2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；和/或，所述L单体为I1)或I2)或I3)： I1)氨基酸序列是序列5的第17-380位所示的蛋白质； I2)将序列表中序列5的第17-380位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质； I3)在I1)或I2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。 19.成套试剂，由下述X1)和X2)组成： X1)与权利要求16-18中任一所述R单体相关的生物材料，为下述X11)至X14)中的任一种： X11)编码权利要求16-18中任一所述R单体的核酸分子； X12)含有X11)所述核酸分子的表达盒； X13)含有X11)所述核酸分子的重组载体、或含有X12)所述表达盒的重组载体； X14)含有X11)所述核酸分子的重组微生物、或含有X12)所述表达盒的重组微生物、或含有X13)所述重组载体的重组微生物； X2)与权利要求16-18中任一所述L单体相关的生物材料，为下述X21)至X24)中的任一种： X21)编码权利要求16-18中任一所述L单体的核酸分子； X22)含有X21)所述核酸分子的表达盒； X23)含有X21)所述核酸分子的重组载体、或含有X22)所述表达盒的重组载体； X24)含有X21)所述核酸分子的重组微生物、或含有X22)所述表达盒的重组微生物、或含有X23)所述重组载体的重组微生物。 20.根据权利要求19所述的成套试剂，其特征在于：X11)所述核酸分子为如下x11)或x12)或x13)： x11)编码序列是序列表中序列2的第62-1306位的cDNA分子或DNA分子； x12)与x11)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求16-18中任一所述R单体的cDNA分子或基因组DNA分子； x13)在严格条件下与x11)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求16-18中任一所述R单体的cDNA分子或基因组DNA分子；和/或，X21)所述核酸分子为如下x21)或x22)或x23)： x21)编码序列是序列表中序列6的第62-1153位的cDNA分子或DNA分子； x22)与x21)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求16-18中任一所述L单体的cDNA分子或基因组DNA分子； x23)在严格条件下与x21)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求16-18中任一所述L单体的cDNA分子或基因组DNA分子。 21.检测生物分子间是否具有相互作用的方法，所述生物分子为名称分别为X与XL的两种生物分子，所述方法包括：将溶液A、溶液B与溶液C混合，得到待测液，所述溶液A为含有权利要求1-18中任一所述A的溶液；所述溶液B为含有权利要求1-18中任一所述B的溶液；所述溶液C为含有权利要求1-16中任一所述C的溶液；所述待测液中所述A中的R与所述B中的L互作发生相变产生相变液滴；根据所述待测液中相变液滴中是否含有所述甲的信号确定所述X与所述XL间是否具有相互作用。 22.鉴定生物分子间调控因子的方法，所述生物分子为名称分别为X与XL的两种生物分子，所述X与所述XL间具有相互作用，所述方法包括：将溶液A、溶液B、溶液C与待测调控因子混合，得到待测液；将所述溶液A、所述溶液B和所述溶液C混合，得到对照液；所述待测液和所述对照液中所述A中的R与所述B中的L互作发生相变产生相变液滴；比较所述待测液和所述对照液相变液滴中所述甲的信号强度确定所述待测调控因子对所述X与所述XL间的相互作用是否具有调控作用；所述溶液A为含有权利要求2-18中任一所述A的溶液；所述溶液B为含有权利要求2-18中任一所述B的溶液；所述溶液C为含有权利要求2-16中任一所述C的溶液。 23.权利要求1-20中任一所述成套试剂的下述任一应用： Z1)在检测或辅助检测生物分子间是否具有相互作用中的应用； Z2)在筛选生物分子间相互作用调控因子中的应用； Z3)在鉴定或辅助鉴定生物分子间相互作用调控因子中的应用； Z4)在检测物质对生物分子间相互作用的影响中的应用； Z5)在制备检测生物分子间是否具有相互作用产品中的应用； Z6)在制备筛选生物分子间相互作用调控因子产品中的应用； Z7)在制备鉴定生物分子间相互作用调控因子产品中的应用。
所属类别：	发明专利