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原文传递检测翻译后修饰蛋白质与其配体间相互作用的成套试剂

专利名称：	检测翻译后修饰蛋白质与其配体间相互作用的成套试剂
摘要：	本发明公开了检测翻译后修饰蛋白质与其配体间相互作用的成套试剂。本发明的成套试剂，由A、B、C和D四种试剂组成；A由名称为R的生物分子和名称为X的蛋白质连接而成；B含有名称为L的生物分子；R与L相同或不同且二者间具有相互作用，R与L相互作用后发生相变；C为由C单体形成的多聚体，C单体由名称为mc的单体、名称为甲的报告基团和名称为YC的生物分子连接得到的分子，大于等于两个的mc能形成多聚体；D由名称为XL的带有修饰的蛋白质和名称为YD的生物分子连接而成；YC与YD间具有相互作用。本发明实现了互作蛋白和配体在相变液滴中的高度富集，将弱互作信号放大，使之易于检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	清华大学
发明人：	李丕龙;李剑;王静;周敏;李维平;王亮;吴荣波;陈鹤
专利状态：	有效
申请日期：	2018-05-14T00:00:00+0800
发布日期：	2019-06-21T00:00:00+0800
申请号：	CN201810455238.1
公开号：	CN109917120A
代理机构：	北京纪凯知识产权代理有限公司
代理人：	关畅
分类号：	G01N33/53(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	100084 北京市海淀区北京市100084信箱82分箱清华大学专利办公室
主权项：	1.成套试剂，由名称分别为A、B、C和D的四种试剂组成；所述A由名称为R的生物分子和名称为X的蛋白质连接而成；所述B含有名称为L的生物分子；所述R与所述L相同或不同且二者间具有相互作用，所述R与所述L相互作用后发生相变；所述C为由C单体形成的多聚体，所述C单体为下述c1)或c2)： c1)由名称为mc的单体、名称为甲的报告基团和名称为YC的生物分子连接得到的分子，大于等于两个的所述mc能形成多聚体； c2)在c1)上连接标签得到的分子；所述D由名称为XL的带有修饰的蛋白质和名称为YD的生物分子连接而成；所述YC与所述YD间具有相互作用。 2.根据权利要求1所述的成套试剂，其特征在于：所述YC与所述YD均为蛋白质。 3.根据权利要求1或2所述的成套试剂，其特征在于：所述YC为Y11)、Y12)或Y13)： Y11)氨基酸序列是序列7的第362-465位所示的蛋白质； Y12)将序列表中序列7的第362-465位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质； Y13)在Y11)或Y12)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；和/或，所述YD为Y21)、Y22)或Y23)： Y21)氨基酸序列是序列11的第22-29位所示的蛋白质； Y22)将序列表中序列11的第22-29位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质； Y23)在Y21)或Y22)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。 4.根据权利要求1-3中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R含有名称为结合区1的结合区；所述L含有名称为结合区2的结合区；所述R与所述L间的相互作用通过所述结合区1和所述结合区2进行，所述R中所述结合区1和所述L中所述结合区2的个数均大于等于2。 5.根据权利要求1-4中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R为蛋白质、核酸或多糖；和/或，所述L为蛋白质、核酸或多糖。 6.根据权利要求1-5中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述A中还连接有名称为乙的报告基团；和/或，所述B中还连接有名称为丙的报告基团。 7.根据权利要求6所述的成套试剂，其特征在于：所述乙和所述丙相同或不同；和/或，所述甲不同于所述乙和所述丙。 8.根据权利要求6或7所述的成套试剂，其特征在于：所述甲、所述乙和所述丙均为荧光报告基团；和/或，所述甲、所述乙和所述丙均为荧光蛋白质。 9.根据权利要求1-8中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述A中所述X和所述R的个数比为大于等于1的整数。 10.根据权利要求1-9中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R为由R单体形成的多聚体，所述R单体均含有名称为mr的单体，大于等于两个的所述mr能形成多聚体；和/或，所述L为由L单体形成的多聚体，所述L单体均含有名称为ml的单体，大于等于两个的所述ml能形成多聚体；所述mc、所述mr与所述ml相同或至少两个相同或彼此间均不同。 11.根据权利要求10所述的成套试剂，其特征在于：所述R中至少有一个单体含有所述结合区1；和/或，所述L中至少有一个单体含有所述结合区2。 12.根据权利要求10或11所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体均含有所述mr和所述结合区1；和/或，所述L单体均含有所述ml和所述结合区2。 13.根据权利要求12所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体中，所述mr与所述结合区1或含有所述结合区1的生物分子通过所述连接区或化学键相连；和/或，所述L单体中，所述ml与所述结合区2或含有所述结合区1的生物分子通过所述连接区或化学键相连。 14.根据权利要求12或13所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体均还含有所述乙；和/或，所述L单体均还含有所述丙。 15.根据权利要求14所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体中，所述mr、所述乙与所述结合区1或含有所述结合区1的生物分子通过所述连接区或化学键相连；和/或，所述L单体中，所述ml、所述丙与所述结合区2或含有所述结合区2的生物分子通过所述连接区或化学键相连。 16.根据权利要求10-15中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体均相同，所述L单体均相同，所述C单体均相同；和/或，所述mr与所述ml均为酵母蛋白SmF；和/或，所述mc为枯草芽孢杆菌蛋白Hfq；和/或，所述结合区1为序列1的第364-431位所示的SH3中与序列5的第366-380位所示的PRMH结合的区域；所述结合区2为序列5的第366-380位所示的PRMH中与序列1的第364-431位所示的SH3结合的区域；和/或，所述连接区为(Gly-Gly-Ser)n或含有(Gly-Gly-Ser)n的多肽，n为大于等于2的自然数；和/或，所述甲为红色荧光蛋白；和/或，所述乙和所述丙均为绿色荧光蛋白。 17.根据权利要求13-16中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述mr与所述ml均为序列1的第17-102位所示的酵母SmF；和/或，所述mc为序列7的第17-94位所示的Hfq；和/或，所述含有所述结合区1的生物分子为序列1的第364-431位所示的SH3；和/或，所述含有所述结合区2的生物分子为序列5的第366-380位所示的PRMH。 18.根据权利要求10-17中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述R单体为H1)或H2)或H3)： H1)氨基酸序列是序列1的第17-431位所示的蛋白质； H2)将序列表中序列1的第17-431位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质； H3)在H1)或H2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；和/或，所述L单体为I1)或I2)或I3)： I1)氨基酸序列是序列5的第17-380位所示的蛋白质； I2)将序列表中序列5的第17-380位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质； I3)在I1)或I2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质；和/或，所述C单体为J1)或J2)或J3)： J1)氨基酸序列是序列7的第17-465位所示的蛋白质； J2)将序列表中序列7的第17-465位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质； J3)在J1)或J2)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。 19.成套试剂，由下述X1)、X2)、X3)和X4)组成： X1)与权利要求16-18中任一所述R单体相关的生物材料，为下述X11)至X14)中的任一种： X11)编码权利要求16-18中任一所述R单体的核酸分子； X12)含有X11)所述核酸分子的表达盒； X13)含有X11)所述核酸分子的重组载体、或含有X12)所述表达盒的重组载体； X14)含有X11)所述核酸分子的重组微生物、或含有X12)所述表达盒的重组微生物、或含有X13)所述重组载体的重组微生物； X2)与权利要求16-18中任一所述L单体相关的生物材料，为下述X21)至X24)中的任一种： X21)编码权利要求16-18中任一所述L单体的核酸分子； X22)含有X21)所述核酸分子的表达盒； X23)含有X21)所述核酸分子的重组载体、或含有X22)所述表达盒的重组载体； X24)含有X21)所述核酸分子的重组微生物、或含有X22)所述表达盒的重组微生物、或含有X23)所述重组载体的重组微生物； X3)与权利要求1-18中任一所述C单体相关的生物材料，为下述X31)至X34)中的任一种： X31)编码权利要求1-18中任一所述C单体的核酸分子； X32)含有X31)所述核酸分子的表达盒； X33)含有X31)所述核酸分子的重组载体、或含有X32)所述表达盒的重组载体； X34)含有X31)所述核酸分子的重组微生物、或含有X32)所述表达盒的重组微生物、或含有X33)所述重组载体的重组微生物； X4)与权利要求1-18中任一所述YD相关的生物材料，为下述X41)至X44)中的任一种： X41)编码权利要求1-18中任一所述YD的核酸分子； X42)含有X41)所述核酸分子的表达盒； X43)含有X41)所述核酸分子的重组载体、或含有X42)所述表达盒的重组载体； X44)含有X41)所述核酸分子的重组微生物、或含有X42)所述表达盒的重组微生物、或含有X43)所述重组载体的重组微生物。 20.根据权利要求19所述的成套试剂，其特征在于：X11)所述核酸分子为如下x11)或x12)或x13)： x11)编码序列是序列表中序列2的第62-1306位的cDNA分子或DNA分子； x12)与x11)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求16-18中任一所述R单体的cDNA分子或基因组DNA分子； x13)在严格条件下与x11)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求16-18中任一所述R单体的cDNA分子或基因组DNA分子；和/或，X21)所述核酸分子为如下x21)或x22)或x23)： x21)编码序列是序列表中序列6的第62-1153位的cDNA分子或DNA分子； x22)与x21)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求16-18中任一所述L单体的cDNA分子或基因组DNA分子； x23)在严格条件下与x21)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求16-18中任一所述L单体的cDNA分子或基因组DNA分子；和/或，X31)所述核酸分子为如下x31)或x32)或x33)： x31)编码序列是序列表中序列8的第51-1400位的cDNA分子或DNA分子； x32)与x31)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1-18中任一所述C单体的cDNA分子或基因组DNA分子； x33)在严格条件下与x31)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1-18中任一所述C单体的cDNA分子或基因组DNA分子。 21.根据权利要求1-20中任一所述的成套试剂，其特征在于：所述修饰为蛋白质翻译后修饰或蛋白质翻译后修饰的去修饰；进一步，所述蛋白质翻译后修饰为甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化或糖基化修饰；所述蛋白质翻译后修饰的去修饰为去甲基化、去乙酰化、去磷酸化、去泛素化或去糖基化。 22.检测生物分子间是否具有相互作用的方法，所述生物分子为名称分别为X与XL的两种生物分子，所述XL为带有修饰的蛋白质，所述X为蛋白质，所述方法包括：将溶液A、溶液B、溶液C和溶液D混合，得到待测液，所述溶液A为含有权利要求1-18中任一所述A的溶液；所述溶液B为含有权利要求1-18中任一所述B的溶液；所述溶液C为含有权利要求1-18中任一所述C的溶液；所述溶液D为含有权利要求1-18中任一所述D的溶液；所述待测液中所述A中的R与所述B中的L互作发生相变产生相变液滴；根据所述待测液中相变液滴中是否含有所述甲的信号确定所述X与所述XL间是否具有相互作用。 23.根据权利要求22所述的方法，其特征在于：所述修饰为蛋白质翻译后修饰或蛋白质翻译后修饰的去修饰；进一步，所述蛋白质翻译后修饰为甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化或糖基化修饰；所述蛋白质翻译后修饰的去修饰为去甲基化、去乙酰化、去磷酸化、去泛素化或去糖基化。 24.权利要求1-21中任一所述成套试剂的下述任一应用： Z1)在检测或辅助检测带有修饰的蛋白质与其他生物分子间是否具有相互作用中的应用； Z2)在筛选带有修饰的蛋白质与其他生物分子间相互作用调控因子中的应用； Z3)在鉴定或辅助鉴定带有修饰的蛋白质与其他生物分子相互作用调控因子中的应用； Z4)在检测物质对带有修饰的蛋白质与其他生物分子间相互作用的影响中的应用； Z5)在检测蛋白质是否具有参与蛋白质翻译后修饰的酶活中的应用； Z6)在制备检测带有修饰的蛋白质与其他生物分子间是否具有相互作用产品中的应用； Z7)在制备筛选带有修饰的蛋白质与其他生物分子间相互作用调控因子产品中的应用； Z8)在制备鉴定带有修饰的蛋白质与其他生物分子间相互作用调控因子产品中的应用； Z9)在制备检测蛋白质是否具有参与蛋白质翻译后修饰的酶活产品中的应用。
所属类别：	发明专利