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原文传递一种蛋白质芯片荧光检测方法

专利名称：	一种蛋白质芯片荧光检测方法
摘要：	本发明涉及一种蛋白质芯片荧光检测方法，包括：步骤一：在玻璃片表面进行PL处理；步骤二：对进行过PL处理的玻璃片进行ELISA实验；所述步骤一包括：步骤(1)分别使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片；步骤(2)将玻璃片用氮气吹干后，将玻璃片浸没在溶于水浓度为2.5M的NaOH溶液中室温下反应2h；步骤(3)使用流水冲洗干净玻璃片并氮气吹干，再用0.1％PL溶液室温下与玻璃片表面反应2h，清洗干净后得到表面附着有PL的玻璃载体。本发明提供的方法，操作简单，成本低，检测尺寸大小可调节和低浓度蛋白质的荧光检测性能，操作者只需首先制备所需PDMS模具，再在特定区域化学处理玻璃载体表面，就可得到所需大小的检测区域，捕获均匀。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏医联生物科技有限公司
发明人：	杨文婷;曹臻;陈亮
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910046417.4
公开号：	CN109765356A
代理机构：	北京文苑专利代理有限公司
代理人：	朱青
分类号：	G01N33/53(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	225000 江苏省扬州市高新技术产业开发区开发西路217号
主权项：	1.一种蛋白质芯片荧光检测方法，其特征在于，包括：步骤一：在玻璃片表面进行PL处理；步骤二：对进行过PL处理的玻璃片进行ELISA实验。 2.根据权利要求1所述的蛋白质荧光检测方法，其特征在于，所述步骤一包括：步骤(1)分别使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片；步骤(2)将玻璃片用氮气吹干后，将玻璃片浸没在溶于水浓度为2.5M的NaOH溶液中室温下反应2h；步骤(3)使用流水冲洗干净玻璃片并氮气吹干，再用0.1％PL溶液室温下与玻璃片表面反应2h，清洗干净后得到表面附着有PL的玻璃载体。 3.根据权利要求1所述的蛋白质荧光检测方法，其特征在于，所述步骤一包括：步骤(1)使用玻璃棒将10:1比例配置的PDMS溶液混合均匀，再抽真空1h除干净气泡；步骤(2)将该PDMS混合液缓缓倒在干净Si片上，80℃加热1h实现固化；步骤(3)用刀将PDMS固化块切成多个小块，在小块上用打孔器在其中心打上贯穿的圆形进样口，得到PDMS模具；步骤(4)使用丙酮，异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片和PDMS模具各5min；步骤(5)氮气吹干后使玻璃载体特定区域与PDMS模具进样口对准贴合，再用夹具将两者机械固定；步骤(6)将PDMS模具用夹具上层板和下层板夹起来，PDMS模具上的进样口与上层板上的一个圆孔对齐，用螺栓螺母固定住夹具；步骤(7)通过上层板上的圆孔向进样口加入10μL 0.1％PL溶液，在室温下与玻璃片表面反应2h，清洗干净后得到表面附着有PL的玻璃载体。 4.根据权利要求1-3任一项所述的蛋白质荧光检测方法，其特征在于，所述步骤二包括：步骤1)在该载体表面加入20μg/ml的cTnI单克隆抗体溶液室温下反应2h，实现cTnI捕获；步骤2)清洗后再加入5％牛血清蛋白溶液室温下反应1h；步骤3)清洗后再加入不同浓度cTnI溶液室温下反应2h；步骤4)清洗后加入20μg/ml cTnI多克隆抗体溶液室温下反应2h；步骤5)清洗后加入2μg/ml荧光标记的兔抗山羊IgG溶液室温下反应1h；步骤6)清洗干净后，在荧光显微镜下测得各浓度cTnI对应的荧光强度，得到荧光免疫曲线，并与未经过化学处理的干净玻璃片进行对比。 5.根据权利要求1-3所述的蛋白质荧光检测方法，其特征在于，所述夹具包括矩形的上层板和下层板，上层板和下层板的形状和尺寸均相同，上层板和下层板上靠近外周边缘处均对应开设有四个螺栓孔，上层板的中心位置开设有多个圆孔。 6.根据权利要求1-5所述的蛋白质荧光检测方法，其特征在于，夹具上层板的长为50mm，宽为40mm，中间开设有9个圆孔，排列成3行3列，行与行之间的距离为6mm，列与列之间的距离为10mm，螺栓孔距离板的长边的距离为5mm，距离板的短边的距离为12.5mm。 7.根据权利要求1-3所述的蛋白质荧光检测方法，其特征在于，所述夹具为玻璃材料、聚四氟乙烯材料或亚克力材料制成。 8.根据权利要求1-3所述的蛋白质荧光检测方法，其特征在于，在步骤3)中，cTnI溶液浓度范围为1pg/ml-1μg/ml。
所属类别：	发明专利