详情

原文传递一种戊肝IgM抗体的检测方法及试剂盒

专利名称：	一种戊肝IgM抗体的检测方法及试剂盒
摘要：	本发明公开了一种戊肝IgM抗体的检测方法及试剂盒，解决了现有技术中灵敏度低、特异性不好的问题。本发明的检测方法，包括以下步骤：抗原包被；封闭；第一步温育反应；第二步温育反应：向反应板的每个微孔中加入生物素标记的羊抗人IgM多克隆抗体和链霉亲和素标记的吖啶酯，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤；化学发光测定。本发明的试剂盒，包括包被反应板、标记物、信号生成物、阴性对照、阳性对照。本发明设计科学，方法简单，通过引入生物素链霉亲和素信号放大系统，使用吖啶酯类化学发光物质，可有效增强免疫复合物与发光物质结合，极大地提高了灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	四川;51
申请人：	中国医学科学院输血研究所
发明人：	付萍;刘鱼;吴秉婷;柯玲;李天成
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910084802.8
公开号：	CN109765372A
代理机构：	成都九鼎天元知识产权代理有限公司
代理人：	刘小彬
分类号：	G01N33/576(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	610052 四川省成都市成华区华彩路26号
主权项：	1.一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1.抗原包被：将HEV基因重组抗原溶解于包被缓冲液后，再将反应板置于该包被缓冲液中，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤；步骤2.封闭：将经步骤1处理后的反应板用封闭缓冲液封闭，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤，而后干燥；步骤3.第一步温育反应：在经步骤2处理后的反应板的微孔中先加入样本稀释液，然后将样品、阴性对照、阳性对照按顺序加入相应的微孔中，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤；步骤4.第二步温育反应：向经步骤3处理后的反应板的每个微孔中加入生物素标记的羊抗人IgM多克隆抗体和链霉亲和素标记的吖啶酯，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤；步骤5.化学发光测定：向经步骤4处理后的反应板的每个微孔中加入激发剂A和激发剂B，进行化学发光反应，测定发光强度。 2.根据权利要求1所述的一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，所述步骤1中，HEV基因重组抗原包被浓度为1000-2000ng/1mL，包被体积为100μL/孔包被缓冲液。 3.根据权利要求1所述的一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，所述激发剂A为HNO3，激发剂B为曲那通100。 4.根据权利要求1所述的一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，所述步骤1中的孵育条件为25-40℃静置12-24小时；所述步骤2中的孵育条件为37±1℃静置1-2小时；所述步骤3中的孵育条件为37±1℃温育60±2分钟；所述步骤4中的孵育条件为37±1℃温育60±2分钟。 5.根据权利要求1所述的一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，所述阴性对照为灭活阴性人血浆，用于验证临床标本的无反应性。 6.根据权利要求1所述的一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，所述阳性对照为灭活人HEV-IgM抗体阳性血浆，用于验证临床标本的有反应性。 7.根据权利要求1所述的一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，所述HEV基因重组抗原包括通过基因工程技术制备的戊型肝炎病毒基因重组抗原，或通过合成方法制备的戊型肝炎病毒基因重组抗原。 8.根据权利要求7所述的一种戊肝IgM抗体的检测方法，其特征在于，所述HEV基因重组抗原，来源ORF2(112-608)，以HEV病毒侵染细胞后得到的细胞培养产物、以原核生物或真核生物为表达载体根据基因工程而得到的HEV基因重组抗原。 9.一种戊肝IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，包括以下组分：包被反应板：包被了HEV基因重组抗原的固相材料；标记物：用生物素标记的羊抗人IgM多克隆抗体；信号生成物：链霉亲和素标记的吖啶酯类化合物；阴性对照：灭活阴性人血浆，用于验证临床标本的无反应性；阳性对照：灭活人HEV-IgM抗体阳性血浆，用于验证临床标本的有反应性。 10.根据权利要求9所述的一种戊肝IgM抗体检测试剂盒，其特征在于，所述固相材料选自聚苯乙烯乳胶、聚苯乙烯塑料、聚氯乙烯塑料、脂质体、免疫磁性微珠中的任意一种。
所属类别：	发明专利