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原文传递一种检测HPV IgM抗体试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种检测HPV IgM抗体试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明涉及检测技术领域，具体公开了一种检测HPV IgM抗体试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括辣根过氧化酶标记的羊抗人IgM抗体、酶标板、样本稀释液、洗液、显色液和终止液；酶标板的反应孔包被有HPV L1‑VLP抗原；HPV L1‑VLP抗原通过将HPV病毒的L1基因删除N末端序列同时采用点突变改造L1基因并进行蛋白质表达、蛋白质纯化和颗粒组装制得。本发明通过辣根过氧化酶标记羊抗人IgM抗体，并且在酶标板上包被HPV L1‑VLP抗原，使检测样本抗体与被包被固定的HPV L1‑VLP抗原，结合辣根过氧化酶标记的羊抗人IgM抗体形成免疫复合物，从而使检测的灵敏度、特异性更高，且结果稳定性更好。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东省一鼎生物技术有限公司
发明人：	陆家海;廖聪慧;叶宇翔;肖人苗
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-26T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-14T00:00:00+0800
申请号：	CN202310927572.3
公开号：	CN117054648A
代理机构：	广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：	廖奇丽
分类号：	G01N33/569;G01N33/535;G01N33/531;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/535;G01N33/531;G01N33/58
申请人地址：	528199 广东省佛山市三水区云东海街道南丰大道63号四座4层410
主权项：	1.一种检测HPV IgM抗体试剂盒，其特征在于，包括辣根过氧化酶标记的羊抗人IgM抗体、酶标板、样本稀释液、洗液、显色液和终止液；所述酶标板的反应孔包被有HPV L1-VLP抗原；所述HPV L1-VLP抗原通过将HPV病毒的L1基因删除N末端序列同时采用点突变改造L1基因并进行蛋白质表达、蛋白质纯化和颗粒组装制得。 2.根据权利要求1所述的检测HPV IgM抗体试剂盒，其特征在于，所述HPV病毒的L1基因为HPV6 L1基因、HPV11 L1基因、HPV16 L1基因、HPV18 L1基因、HPV31 L1基因、HPV26 L1基因、HPV33 L1基因、HPV35 L1基因、HPV45L1基因、HPV39 L1基因、HPV45 L1基因、HPV51 L1基因、HPV52 L1基因、HPV53 L1基因、HPV56 L1基因、HPV58 L1基因、HPV59 L1基因中的至少一种。 3.权利要求1至2中任一项所述的检测HPV IgM抗体试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：稀释HPV L1-VLP抗原至包被浓度并加入到酶标板的反应孔，使用抗原洗涤缓冲液洗涤，再加入5％牛血清白蛋白封闭，封闭完成后进行清洗、密封使酶标板的反应孔包被有HPVL1-VLP抗原；将羊抗人IgM抗体与辣根过氧化酶混合并进行透析，制得辣根过氧化酶标记的羊抗人IgM抗体。 4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述包被浓度为0.5-4μg/mL。 5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述封闭的温度为4℃或37℃。 6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述封闭的时间为0.5-2h。 7.权利要求1至2中任一项所述的检测HPV IgM抗体试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将待测样品用样本稀释液稀释后加入包被有HPV L1-VLP抗原的酶标板中混合孵育；弃混合液体，洗涤；向酶标板中加入辣根过氧化酶标记的羊抗人IgM抗体孵育，弃混合液体，洗涤；加入显色液孵育，孵育完毕后加入终止液终止反应，并进行结果判断。 8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品用PBS缓冲液稀释的方法为将待测样本用样本稀释液按照1：100-800的体积比进行稀释。 9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述显色液为TMB显色液。 10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述终止液为硫酸溶液。
所属类别：	发明专利