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原文传递一种天然植物提取物中亚硝酸盐的测定

专利名称：	一种天然植物提取物中亚硝酸盐的测定
摘要：	本发明涉及一种天然植物提取物中亚硝酸盐的检测技术，采用表面增强拉曼光谱法测定。试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与硝基苯胺和1‑苯胺发生重氮化反应，生成4‑(4‑消极苯基偶氮)‑1‑萘胺，NNA可以吸附在贵金属纳米粒子的表面，产生很强的SERS信号，间接测得亚硝酸盐含量，实现快速定性、定量、便捷、低成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	河北;13
申请人：	河北省食品检验研究院
发明人：	王红;张兰天;李挥;张岩;张会军;郭美娟;马宁;常化仿
专利状态：	有效
申请日期：	2019-01-18T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-17T00:00:00+0800
申请号：	CN201910049576.X
公开号：	CN109765208A
代理机构：	北京卓特专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	陈变花
分类号：	G01N21/65(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	050000 河北省石家庄市中华南大街537号
主权项：	1.一种天然植物提取物中亚硝酸盐的测定，其中：包括以下步骤： (一)试剂配制 a.乙醇：吸取10mL无水乙醇，用水定容至100mL； b.盐酸：量取8.3mL盐酸，用水稀释至1000mL； c.1-萘胺溶液：称取0.1000g 1-萘胺，溶于10％乙醇溶液中，用10％乙醇溶液定容至100mL； d.对硝基苯胺溶液：称取0.1000g 1-萘胺，溶于10％乙醇溶液中，用10％乙醇溶液定容至100mL； (二)标准溶液配制 a.亚硝酸钠：基准试剂，或采用具有标准物质证书的亚硝酸盐标准溶液； b.亚硝酸钠标准溶液：准确称取0.1000g于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解，移入1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀； c.亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取0.10mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL、10.00mL亚硝酸钠标准溶液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，得到浓度为0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L的标准使用液； (三)分析步骤仪器：天平：感量为0.1mg和1mg；便携式拉曼光谱仪；漩涡混匀器；仪器条件：功率200mW，积分时间10sec，平均次数3次，平滑参数1，定量时每个样品平行测定3次取平均值； a.标准曲线取7只5mL离心管，均加入适量对硝基苯胺溶液和1-苯胺溶液，用盐酸溶液稀释至3mL混匀，室温放置10min，分别加入水、50μL亚硝酸盐标准使用液0.10mg/L、0.50mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.00mg/L，在室温条件下反应20min，得到7种浓度的重氮化反应产物；移取一定量贵金属纳米粒子溶液于1cm石英池中，加入适量上述重氮化反应产物，混匀放置5min，在便携式拉曼光谱仪器测定SERS光谱，分别计算720、1459、1609cm-1处的特征峰面积；以峰面积为纵坐标，亚硝酸盐浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到3个标准曲线方程； b.试样提取称取一定质量的试样，第一次加适量体积量水摇匀，依次加入适量体积量亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入适量乙酸锌溶液，加水至2.5mL，摇匀，过0.45μm的微孔膜备用； c.重氮反应 5mL离心管中加入适量对硝基苯胺溶液和1-苯胺溶液，用盐酸溶液稀释至3.0mL，室温放置10min，加入50μL亚硝酸标准溶液或样品溶液，在室温条件下反应20min，得到重氮化反应产物，同时做空白试验； d.SERS检测移取一定量贵金属纳米粒子溶液于1cm石英池中，加入适量上述重氮化反应产物，混匀放置5min，在便携式拉曼光谱仪器测定SERS光谱，分别计算720、1459、1609cm-1处的特征峰面积；以峰面积为纵坐标，亚硝酸盐浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到3个标准曲线方程； e.分析结果的表述试样中亚硝酸盐的含量按式(1)计算：式中： X——试样中的亚硝酸盐的含量，单位为毫克/千克； m——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为毫克； 2.5——转化系数； C720，C1495，C1609，C0，720，C0，1459,C0,1609——分别为由特征峰720、1459、1609的峰面积查标准曲线得到的试样和空白试验中亚硝酸盐的浓度，单位为毫克/升； C，C0——分别为由三个特征峰曲线计算得到试样和空白试样中亚硝酸盐的平均浓度，单位为毫克/升； 2.5——试样处理液总体积，单位为毫升。 2.根据权利要求1所述一种天然植物提取物中亚硝酸盐的测定，其特征在于标准曲线中，所述加入的对硝基苯胺溶液与1-苯胺溶液体积比为1-10:1；优选1-5:1；更优选4:1；所述贵金属纳米粒子为金纳米粒子、银纳米粒子或铜纳米粒子中的任意一种，优选银纳米粒子；所述加入的贵金属纳米粒子溶液与重氮化反应产物体积比为1-10:1；优选1-5:1；更优选3:1。 3.根据权利要求1所述一种天然植物提取物中亚硝酸盐的测定，其特征在于试样提取过程中，所述第一次加入水量与试样量的比例关系为，V:m＝1-10:1；优选1-5:1；更优选4:1；所述加入的亚铁氰化钾溶液、试样量的比例关系为，V:m＝100-500:1；优选100-250:1；更优选200:1；所述加入的乙酸锌溶液与试样量的比例关系为，V:m＝100-500:1；优选100-250:1；更优选200:1；所述加入的亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液比例关系为，V:V＝1-10:1；优选1-5:1；更优选1:1。 4.根据权利要求1所述一种天然植物提取物中亚硝酸盐的测定，其特征在于重氮反应过程中，所述加入的对硝基苯胺溶液与1-苯胺溶液体积比为1-10:1；优选1-5:1；更优选4:1。 5.根据权利要求1或4所述一种天然植物提取物中亚硝酸盐的测定，其特征在于SERS检测过程中，所述贵金属纳米粒子为金纳米粒子、银纳米粒子或铜纳米粒子中的任意一种，优选银纳米粒子；所述加入的贵金属纳米粒子溶液与重氮化反应产物体积比为1-10:1；优选1-5:1；更优选3:1。
所属类别：	发明专利